[发明专利]骨骼肌组织线粒体的提取方法

说明书

本发明公开了一种骨骼肌组织线粒体的提取方法，包括以下步骤：步骤一：取肌肉组织，切成肉糜；步骤二：将肉糜与裂解液混合并匀浆，得匀浆液；步骤三：离心得第一上清液，将第一上清液过滤，得第一滤液，将第一滤液离心，得第二上清液，将第二上清液离心得第一沉淀；步骤四：向步骤三制得的第一沉淀中加入洗涤缓冲液，混匀，离心得第三上清液，再将第三上清液离心得第二沉淀，即得骨骼肌组织线粒体。同时，通过改进裂解液、洗涤缓冲液和保存缓冲液配方，改进匀浆器结构，获得提取率、纯度均较高的骨骼肌线粒体，解决了骨骼肌组织线粒体提取存在的提取率低、杂蛋白含量高，提取效果差的问题。

技术领域

本发明涉及一种线粒体的提取方法。更具体地说，本发明涉及一种骨骼肌组织线粒体的提取方法，属于线粒体提取技术领域。

背景技术

肌肉组织中线粒体是生物体产生能量的“工厂”，对生物体机能有重要影响，是食品、生物、医药等领域研究的热点，越来越多的学者致力于线粒体结构、功能和线粒体蛋白特性的研究，因此肌肉组织线粒体的提取方法快速、高效，所提取的线粒体足量、纯度高至关重要。

根据肌肉结构和功能不同，可分为骨骼肌、心肌、平滑肌，其中心肌和肝脏组织作为动物组织线粒体提取的原料应用较多，其细胞易破碎，提取方法比较成熟，相比之下，骨骼肌细胞韧性较高，不易破碎，造成提取率低、杂蛋白含量高，提取效果差，亟待研发新的适用于骨骼肌组织的线粒体提取方法，提升骨骼肌组织线粒体的提取率，为开展骨骼肌线粒体结构、功能和线粒体蛋白特性分析与研究提供技术支撑。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明的一个目的是提供一种骨骼肌组织线粒体的提取方法，提高骨骼肌线粒体的提取率，为开展骨骼肌线粒体结构、功能和线粒体蛋白特性分析与研究提供技术支撑。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种骨骼肌组织线粒体的提取方法，包括以下步骤：

步骤一：取肌肉组织，切成肉糜；

步骤二：将肉糜与裂解液混合并匀浆，得匀浆液；其中，肉糜与裂解液的质量体积比为1.5～2g:5ml；

步骤三：将匀浆液置于温度为2～4℃、离心力为1300～1500g条件下离心5～8min，得第一上清液，将第一上清液过滤，得第一滤液，将第一滤液置于温度为2～4℃、离心力为1300～1500g条件下离心5～8min，得第二上清液，将第二上清液置于温度为2～4℃、离心力为15000～16000g条件下离心15～20min，得第一沉淀；

步骤四：向步骤三制得的第一沉淀中加入洗涤缓冲液，混匀，置于温度为2～4℃、离心力为1300～1500g条件下离心5～8min，得第三上清液，再将第三上清液置于温度为2～4℃、离心力为15000～16000g条件下离心15～20min，得第二沉淀；其中，洗涤缓冲液与第一沉淀的体积质量比为0.1ml/100μg。

优选的是，所述的骨骼肌组织线粒体的提取方法，步骤一中肌肉组织为骨骼肌。

优选的是，所述的骨骼肌组织线粒体的提取方法，步骤一中骨骼肌在离体12h内降至0～4℃。

优选的是，所述的骨骼肌组织线粒体的提取方法，步骤一中骨骼肌为温度为0～4℃、离体24h内的样本。

优选的是，所述的骨骼肌组织线粒体的提取方法，步骤一中切成的肉糜小于2mm³。

优选的是，所述的骨骼肌组织线粒体的提取方法，步骤三中将第一上清液过滤时，纱布的层数不小于8。