[发明专利]防治七叶一枝花根腐病的芽孢杆菌及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了防治七叶一枝花根腐病的芽孢杆菌及其制备方法与应用，通过采用多粘类芽孢杆菌菌株HJ‑2对镰刀菌游动孢子进行感染，进而抑制镰刀菌孢子的萌发，减轻镰刀菌对七叶一枝花根茎部的危害，从而减轻根腐病对七叶一枝花危害，保证七叶一枝花产量，减少药农经济损失；而且本发明采用多粘类芽孢杆菌菌株HJ‑2生物防止，不会产生农药残留、具有绿色可循环、防治效果好、避免农药残留污染等特点。

技术领域

本发明涉及生防菌技术领域，特别涉及防治七叶一枝花根腐病的芽孢杆菌及其制备方法与应用。

背景技术

七叶一枝花为百合科(Liliaceae)重楼属(Paris)植物，多生长在海拔800—1300米的林中阴温处，分布于十堰市的房县、竹山、竹溪、武当山、伏龙山(赛武当)，是鄂西北最具特色道地药材“四个一”；《中国药典》2015版收载重楼药材来源为百合科植物云南重楼或七叶一枝花的干燥根茎，七叶一枝花是云南白药、季德胜蛇药、宫血宁等多种名贵中成药的重要组方药物；由于十堰地区海拔普遍较高，森林覆盖率高，七叶一枝花在十堰及周边县市种植面积最大，十堰市伏龙山七叶一枝花已被国家列为地理标志产品；林下中药材种植已经成为十堰市经济中的重要增长点，当地七叶一枝花栽培面积达 3000亩以上；

根腐病是七叶一枝花最重要的病害之一，属于土传病害，以土壤为媒介进行传播，在潮湿多雨季节病害发生尤为严重，易造成大面积流行从而导致七叶一枝花绝产，严重影响产量，限制中药材产业发展，造成重大经济损失；目前发现，镰刀菌是造成七叶一枝花根腐病的主要病原菌，研究显示5种镰刀菌(F.solani f.sp. paris,F.graminearumf.sp.paris，F.oxysporum,F.equiseti, F.tricinctum)都能侵染七叶一枝花根茎部造成根腐病；

目前根腐病的防治措施主要是喷洒多菌灵或化学药剂对土壤进行消毒，但效果不理想，多年的防治导致病原菌抗药性增加，土壤退化，重茬障碍、多菌灵过量残留等诸多问题发生严重，七叶一枝花产量和品质均受到影响；因此，发掘具有生防潜力的菌株、研发可代替化学杀菌剂的生物源杀菌剂对七叶一枝花根腐病的防治有重大意义。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明旨在提供防治七叶一枝花根腐病的芽孢杆菌及其制备方法与应用，通过采用多粘类芽孢杆菌菌株HJ-2 对镰刀菌(F.oxysporum)游动孢子萌发的抑制，减轻镰刀菌对七叶一枝花根茎部的危害，从而保证七叶一枝花产量，减少药农经济损失；而且采用多粘类芽孢杆菌菌株HJ-2生物防止，具有绿色可循环，避免农药残留污染的特点。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种用于防治七叶一枝花根腐病的芽孢杆菌，所述芽孢杆菌菌株命名为(Paenibacillus Polymyxa HJ-2)，该菌株，已于2019年8 月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.M 2019617。保藏地址：湖北省武汉市武昌区东湖南路8号。

优选的，所述的HJ-2的生长表型特征为：在PDA培养基上经25℃培养48h后，形成无色透明状HJ-2菌落，菌落湿润发粘，边缘整齐。

优选的，所述的HJ-2的生化表型特征为：分解葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇、甘油和乳糖；柠檬酸钠和琥珀酸钠利用试验阴性；不产生H₂S；接触酶试验阳性，氧化酶试验阴性；硝酸还原试验、水解酪蛋白试验、水解淀粉试验、V-P试验阳性。

优选的，所述的HJ-2的16S rDNA序列如seq ID NO.1所示。

优选的，所述多粘类芽孢杆菌菌株HJ-2的具体制备步骤如下：

步骤一：多粘类芽孢杆菌菌株HJ-2的分离

(1)土壤样品采集：从湖北省十堰市七叶一枝花种植基地采集 8-12cm深处的健康七叶一枝花根际土壤，带回实验室；