[发明专利]激活RNA调控启动子克服转基因沉默效应的方法

权利要求书

1.一种激活RNA调控启动子克服转基因沉默效应的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）选择不含增强子且转录起始位点含有CpG岛的启动子为靶启动子，所述靶启动子为人源SOX2基因启动子，其基因序列如序列2所示；用所述靶启动子替换商业载体pEGFP-C1上外源基因表达框中的CMV启动子，构建中间载体Ⅰ；

（2）在所述中间载体Ⅰ的外源基因表达框上游Ase I酶切位点插入UCOE截断序列，构建中间载体Ⅱ；

（3）在所述中间载体Ⅱ的外源基因表达框下游，插入针对所述靶启动子的表达激活RNA基因的shRNA基因表达框，获得最终载体；所述表达激活RNA基因的shRNA基因表达框的序列如序列1所示；

所述最终载体经验证能使EGFP基因表达量持续稳定高效表达。

2.根据权利要求1所述激活RNA调控启动子克服转基因沉默效应的方法，其特征在于，所述构建中间载体Ⅰ的步骤中，用带AgeI和AseI双酶切位点引物扩增所述靶启动子序列，所述引物为：

SOX2＃正向引物：CCGTGATTAATAGACAAGGAAGGTTTTGAGGAC

SOX2＃反向引物：ATATGACCGGTATCCGGGCTGTTTTTCTGGTT。