[发明专利]新型绞股蓝多糖的提取工艺优化及分离纯化

说明书

本发明涉及在绞股蓝中提取到的多糖与前人已进行研究过的多糖为完全不同的多糖，主要是由于实验操作不同得到的多糖分子量也不同，从而多糖类型不同。

技术领域

本发明涉及糖生物化学、食品保健和医药领域，具体的说是新型的绞股蓝多糖从绞股蓝中提取并分离纯化的过程。

背景技术

绞股蓝多糖提取、分离纯化的方法有很多，不同的试验方法，所得到的糖种类和糖结构千变万化。提取多糖可以采取不同的方法，主要为热提、稀酸提、稀碱提，超声辅助提取、微波辅助提取和酶辅助提取。通过脱脂、脱色、脱蛋白、分级纯化等步骤进行多糖的分离纯化。Ai-Ping Chi等利用微波辅助的方法从水提的绞股蓝得到粗糖并经DEAE-52和Sephadex G-150分离得到三个纯化多糖组分；周宝珍等优化了提取和纯化工艺，利用DEAE-52和G-200柱层析得到两种多糖GPM-1(200576Dal)和GPM-2(166861Dal)；肖增平等对绞股蓝粗多糖初步纯化之后，经DEAE-Sephrose离子交换柱、Superdex 200凝胶柱分离，收集各组分，再经一脱盐，最后冷冻干燥得绞股蓝精制多糖GPS-2(10700Dal)、GPS-3(9100Dal)；郭晓波等采用水提醇沉的方法提取绞股蓝多糖，经D301G大孔树脂吸附以及DEAE-52离子交换柱氯化钠梯度洗脱得到均一的绞股蓝多糖GPP，将HPLC结合GPC法测得GPP的分子量为2.52×103kDa。本人通过对绞股蓝进行热水提醇沉的方法得到绞股蓝粗多糖，进行高效液相色谱分析后发现分子量为3.297×103kDa的绞股蓝多糖还未被纯化分析，因此对此分子量的多糖进行分离纯化。

发明内容

本发明的目的在于通过一定的试验方法得到未被研究过的新型绞股蓝多糖，为绞股蓝多糖进一步开发利用奠定一定的理论及试验基础。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

(1)原料的准备：植物在提取前做的相应的准备工作(磨粉、脱脂、脱色)。

(2)热水提醇沉多糖的方法。

(3)多糖脱蛋白。

(4)多糖分级纯化。

附图说明

图1为本新型绞股蓝多糖提取及分离纯化过程示意图。

具体实施方式

(1)将干燥绞股蓝利用植物打粉机将干燥后的植物打成粉后过100目筛使其颗粒均匀。

(2)利用精馏塔对上述植物粉在80％的酒精中采取回流提取除去色素及脂类物质。

(3)三因素三水平得到的最佳提取工艺为液料比为35∶1(mL∶g)，提取时间为2.5小时，水浴提取温度为80℃。

(4)反复冻融除蛋白及其他非糖杂质，将多糖溶液放入-20℃冰箱过夜，之后放至室温使多糖溶液融化完全后离心，除去沉淀。反复上述过程直至离心后沉淀极少即可。

(5)高效液相分析结果可知本实验所选多糖分子量大小为3.2974×106道尔顿。

(6)选取规格为10万的透析袋进行透析，流水透析3天后进行蒸馏水透析2天。透析后离心进一步除去杂质，通过真空冷冻干燥备用。

(7)Sephacryl S-400葡聚糖凝胶柱装柱并上样：将泡好的凝胶分子筛用去离子水缓慢冲入柱中，注意不要有气泡产生，保持液面水平，装好分子筛后取冻干的多糖CPS配制成20mg/mL，以7000r/min的速度离心10分钟弃去沉淀，取1mL多糖溶液上样凝胶柱中，加蒸馏水洗脱，流速10滴每分钟，分部收集，每管20滴，采用苯酚硫酸比色法测多糖含量，收集合并相同成分用3500DA透析袋透析，真空冷冻干燥法冻干多糖即为所纯化后的新型多糖。

尽管为说明目的公开了本发明的实施例，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例和附图所公开的内容。本发明包括但不限于上述实施方式，任何符合本权利要求书或说明书描述，符合与本文所公开的原理和新颖性、创造性特点的方法、工艺、产品，均落入本发明的保护范围之内。