[发明专利]检测干扰素治疗慢性乙肝抗病毒疗效的试剂盒及其用法

说明书

本发明公开了检测干扰素治疗慢性乙肝抗病毒疗效的试剂盒及其用法，具体涉及检测试剂盒领域，该检测试剂盒包括CD3‑APC、CD4‑FITC、CD8‑Percp和Tim‑3‑PE单克隆抗体；该试剂盒的具体使用步骤如下：慢性乙肝患者使用干扰素抗病毒治疗前留取外周血，将患者新鲜肝素化全血与指定抗体一起孵育15分钟，然后用红细胞裂解液裂解，随后用PBS缓冲溶液洗涤，使用BD FACSAria流式细胞仪检测并分析。本发明可以对干扰素抗病毒治疗后肝功能的复常、HBV‑DNA的阴转以及HBeAg的血清学转换做到更好的预判，减少无效患者因干扰素治疗而导致的经济损失、病情进展，为乙肝患者制定更精准的抗病毒治疗方案。

技术领域

本发明涉及检测试剂盒技术领域，更具体地说，本发明涉及检测干扰素治疗慢性乙肝抗病毒疗效的试剂盒及其用法。

背景技术

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是嗜肝性DNA病毒，其慢性感染严重危害着全球人类健康。根据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)2017年全球肝炎报告统计，目前全世界大约有2.57亿乙肝病毒慢性感染者。2015年，乙型肝炎导致的死亡人数达到88.7万人，主要是由肝硬化和肝细胞癌等严重并发症引起。目前经抗病毒治疗可使大多数患者的病情得到控制，现治疗慢性乙型肝炎主要包括两大类抗病毒药物：核苷(酸)类似物(nucleos(t)ide analogues，NAs)和干扰素-α(IFN-α)/聚乙二醇化干扰素-α(Peg-IFN-α)。核苷类似物的抗病毒作用主要体现在抑制病毒聚合酶活性，但是长期使用核苷类似物可能出现抗病毒耐药，停药后也容易出现复发。Peg-IFN作为治疗慢乙肝的重要一线药物，特别是对于HBeAg阳性的病人，能够促使其中30％-40％的病人实现HBeAg血清学转化。但是IFN治疗往往会带来副作用，比如流感样症状、白细胞及血小板减少等。因此HBV感染慢性化的具体机制仍然有待进一步深入研究，从而为探索新的治疗方法奠定理论基础。

Tim-3是重要的免疫卡控点分子，现有研究发现其过度表达与慢性乙型肝炎病毒感染密切相关。Tim-3属于Tim家族，是一种T细胞膜蛋白基因，编码免疫球蛋白可变区和粘蛋白区。Tim-3在T细胞介导的免疫应答中发挥重要的免疫调节作用。例如，Sabatos等认为,Tim-3主要表达在分化成熟的Th1细胞上，负性调节Thl细胞免疫应答而起到免疫抑制作用。随后研究指出，Tim-3在自然杀伤细胞(NK细胞)、黑色素瘤细胞、Thl7细胞单核细胞和CD8+T细胞等多种免疫细胞上也有表达，并发挥着一定的生物学效应。在体外实验里,Tim-3与其配体半乳糖凝甘素-9(Galectin-9)结合，使细胞内钙流出发挥其免疫抑制效应，诱导Th1细胞凋亡，当给予Tim-3配体Galectin-9时，使干扰素γ等细胞因子分泌减少，抑制效应明显减弱而使Th1免疫反应下调、诱导免疫耐受。Leinter等研究发现,Tim-3在固有免疫细胞中呈高水平表达，协同Toll样受体促进促炎因子TNF-α的分泌从而促进炎症进程。综上所述,Tim-3信号通路在不同的免疫环境下是发挥重要的免疫调控作用；Tim-3信号通路在多种临床疾病，如感染、肿瘤、自身免疫疾病和移植免疫耐受等的发病机制中扮演重要角色。