[发明专利]一种组织培养繁殖脚板薯种苗的方法

权利要求书

1.一种组织培养繁殖脚板薯种苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)：选择块茎大、无病虫害、肉质紫红色的脚板薯，将其切成小块，每块50-100克，确保每小块块茎均带有芽眼；然后，将每小块的切面沾满草木灰，放在太阳下晒1-2小时，室内晾1-3天；当芽长至2-3厘米时，取1厘米茎段作外植体，剪去展开的叶片；

步骤(2)：将步骤(1)中的外植体完全浸没于饱和洗衣粉溶液10分钟，流水冲洗30-60分钟，在无菌工作台上利用两步法脱毒，即75％酒精消毒30秒，无菌水冲洗2-3次，然后用1～2％次氯酸钠溶液处理10～15分钟，无菌水冲洗4-5次，最后置于无菌滤纸上吸干表面水分；

步骤(3)：将步骤(2)中处理好的外植体接种到丛生芽诱导培养基，培养14天后获得脚板薯丛生芽，再切取再生芽茎段0.5－1厘米接种到丛生芽诱导培养基中，进行诱导分化、增殖培养，当扩繁系数达到10倍时，进行生根培养，白天温度23-27℃，夜间温度18-22℃，光周期12h/d，光照强度3000lx；

步骤(4)：将步骤(3)中获得的不定芽接种到生根培养基中，培养20天后，即可获得大量脚板薯试管苗，白天温度23-27℃，夜间温度18-22℃，光周期12h/d，光照强度3000lx；

步骤(5)：将试管苗移至室外阴凉处放置5-7天，然后开盖保持5-7天，在此过程中喷洒少量水，保持环境湿润，取出试管苗，用自来水洗净根部残留的培养基，再用0.1％KMnO₄浸泡30秒，最后用自来水清洗，将处理好的试管苗移栽至营养钵基质中驯化，将成活的幼苗移栽到大田中，即为脚板薯种苗。

2.根据权利要求1所述的一种组织培养繁殖脚板薯种苗的方法，其特征在于，步骤(1)所述茎段上至少含有一个叶片。

3.根据权利要求1所述的一种组织培养繁殖脚板薯种苗的方法，其特征在于，步骤(3)中的丛生芽诱导培养基以MS为基本培养基，添加40g·L^-1蔗糖，7g·L^-1琼脂，0.4mg·L^-1萘乙酸，3.2mg·L^-16-苄基氨基嘌呤，2.9mg·L^-1烯效唑，1.2g·L^-1活性炭，pH5.8～6.0。

4.根据权利要求1所述的一种组织培养繁殖脚板薯种苗的方法，其特征在于，步骤(4)中的生根培养基以MS为基本培养基，添加40g·L^-1蔗糖，7g·L^-1琼脂，1.6g·L^-1活性炭，0.7mg·L^-1萘乙酸，0.8mg·L^-16-苄基氨基嘌呤，2.9mg·L^-1烯效唑，pH5.8～6.0。

5.根据权利要求1所述的一种组织培养繁殖脚板薯种苗的方法，其特征在于，所述营养钵基质为土壤和珍珠岩，体积比是1∶3；驯化14天后，将成活的幼苗移栽到大田中，即为脚板薯种苗。