[发明专利]一种液质联用测定血浆中西替利嗪浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中西替利嗪浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为西替利嗪的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为1～600ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中西替利嗪的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中西替利嗪浓度的方法。

背景技术

西替利嗪的主要成分是盐酸西替利嗪，其化学名为(+/-)-2-[2-[4-[(4-氯苯基)苯甲基]-1-哌嗪基]乙氧基]乙酸二盐酸盐，其结构式如下：

盐酸西替利嗪是新一代的高效非镇静抗组胺剂，用于治疗组胺引起的季节性、常年性变应性鼻炎，眼睛和皮肤瘙痒，慢性特发性荨麻疹，与其他抗组胺药相比，盐酸西替利嗪的中枢神经系统活性虽然较低。目前国内有多种盐酸西替利嗪剂型上市，如盐酸西替利嗪分散片、盐酸西替利嗪片、盐酸西替利嗪胶囊、盐酸西替利嗪口服液等剂型。

目前，现有关于西替利嗪测定方法的速度、精度和灵敏度均有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中西替利嗪浓度的方法，该方法可提高检测的速度、精度和灵敏度。

为实现上述目的，一种测定血浆中西替利嗪浓度的方法，血浆样品经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样品预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以西替利嗪-d8为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样品，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5μL 的0.2ng/μL的内标西替利嗪-d8溶液，混匀后加入500μL的乙腈于96深孔板中，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液50μL至装有500μL 混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为水：乙腈：甲酸按照体积比65： 35：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；

(2)试样测定：

取10μL测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中西替利嗪和内标西替利嗪-d8的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的西替利嗪浓度；

(3)液相色谱测定，条件为：

色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18，5μm，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸的体积比为100/0.1；流动相B：乙腈/甲酸的体积比为100/0.1；洗液：甲醇/水的体积比为50/50；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间3.5min；

(4)质谱测定，条件为：

离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5000V，雾化温度为500℃，喷雾气压力为60Psi，辅助加热气压力为60Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，去簇电压分别为30eV的西替利嗪和西替利嗪-d8；碰撞室入口电压分别为8eV 的西替利嗪和西替利嗪-d8；碰撞电压分别为25eV的西替利嗪和西替利嗪-d8；碰撞室出口电压分别为10eV的西替利嗪和西替利嗪-d8；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z398.1→m/z201.0，其为西替利嗪；和m/z397.2→m/z201.1，其为西替利嗪-d8。

优选的，所述步骤(3)中梯度洗脱的程序为：