[发明专利]用于肿瘤外泌体自校准检测的双功能杂化薄膜的制备方法

权利要求书

1.用于肿瘤外泌体自校准检测的双功能杂化薄膜的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

(1)二茂铁掺杂的钴基金属有机骨架Fc/ZIF-67复合物的制备：称取一定量的Co(NO₃)₂·6H₂O和2-甲基咪唑，放置于47mL乙醇和3mL去离子水的混合溶剂中，磁力搅拌下形成均匀的混合液，Co(NO₃)₂·6H₂O和2-甲基咪唑的浓度分别调节至0.1～0.5mol/L和0.8～1.5mol/L；将此混合液加入电解槽中，以Ag/AgCl为参比电极，铂丝为对电极，氧化铟锡ITO为工作电极，以-5至-10V恒定电压，循环伏安扫描100～500s，将Fc/ZIF-67复合物电沉积在氧化铟锡ITO电极表面；

(2)黑磷纳米片和二茂铁掺杂的钴基金属有机骨架BPNSs/Fc/ZIF-67复合物的制备：称取10～30mg黑磷晶体加入50mL的1-甲基-2-吡咯烷酮中，在超声波清洗机中超声1～6h后，转入探头式超声波发生器中超声1～4h，产物分散液在12000rpm下离心15min，取上层分散液在5000rpm下离心15min；将制得的黑磷纳米片BPNSs分散液，逐滴添加至Fc/ZIF-67复合物表面，自然干燥，在氧化铟锡ITO电极表面制得BPNSs/Fc/ZIF-67复合物；

(3)适体-BPNSs/Fc/ZIF-67杂化薄膜的制备：将BPNSs/Fc/ZIF-67/ITO薄膜电极浸没在含有1～10μM的CD63跨膜蛋白对应单链DNA适体的磷酸盐水缓冲液中，在37℃下孵育30～120min，取出该薄膜电极，自然干燥，在氧化铟锡ITO电极表面制得适体BPNSs/Fc/ZIF-67复合物，即制得适体-BPNSs/Fc/ZIF-67杂化薄膜；

(4)杂化薄膜传感器的制备：以杂化薄膜为工作电极，置于电化学工作站的三电极体系中，以磷酸盐水缓冲液为电解液，加入从乳腺癌MCF-7细胞提取的外泌体，测定不同外泌体浓度下的电化学方波伏安曲线；以修饰在适体链上的亚甲基蓝MB为响应信号，掺杂在ZIF-67金属有机骨架内的二茂铁Fc为参比信号，以电流峰强度I_Fc/I_MB比值为自校准信号输出，拟合I_Fc/I_MB比值与外泌体浓度之间的线性关系，构建用于外泌体定量检测的自校准传感器；其中，肿瘤外泌体浓度的线性检测范围为1×10²～1×10⁶particlesμL^–1，检测限为50～100particles μL^–1。