[发明专利]白杨素在人造血干细胞体外扩增中的用途

说明书

本发明涉及白杨素在人造血干细胞体外扩增中的用途，在该用途中，白杨素在扩增培养基中的浓度为1‑10μM。本发明还提供了一种人造血干细胞扩增培养基和一种扩增人造血干细胞的方法。本发明白杨素对于人造血干细胞自我更新具有较好的促进作用，可为日后临床治疗提供新的方法。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及白杨素在人造血干细胞体外扩增中的用途。

背景技术

造血干细胞(Hematopoietic Stem Cell,HSC)具有自我更新、多向分化、重建造血潜能以及损伤后自我修复的能力，它的特性使其在白血病治疗、肿瘤病人化疗后造血功能重建以及遗传病、肿瘤的基因治疗等方面发挥着重要作用。脐带血富含造血干细胞，并具有免疫原性低、供体安全、来源广泛、采集容易等优点，因此脐带血移植成为骨髓及外周血造血干细胞移植的极佳替代来源。

然而，脐带血中HSCs的比例仅占0.1％～1％左右，由于造血干祖细胞数量不够、质量欠佳、植活成功率低等诸多棘手问题导致脐带血HSCs移植后难以在患者体内进行有效地造血重建，很大程度上制约了干细胞产业的发展与临床应用。前人研究中曾尝试液体培养基中加入多种细胞因子组合、同基质细胞共培养或在生物反应器中培养等方法以达到体外扩增HSCs的目的，但上述方法扩增效果仍不够理想。因此，在体外安全有效地扩增脐带血干细胞对于临床的移植应用具有很重要的意义。

小分子化合物在体外培养中显示了其独特的优势。首先，小分子化合物相较于细胞因子或转录因子等其性质更为稳定；其次，化合物的作用效果可以通过改变化合物的结构、浓度来调控，其过程简单可控；此外，其给药途径方便多样，前期合成制备流程相对简单、易于大规模生产，有利于临床转化应用。Science杂志2010年报道的嘌呤衍生物SR1、2014年报道的UM171均能够在体外有效扩增人的造血干、祖细胞，除此之外目前还有多个小分子化合物被发现能在体外提高造血细胞亚群的比例，或者提高被处理细胞的移植成功率。因此，在传统扩增造血干细胞的方法中加入小分子化合物，可能对体外培养中失去体内niche环境而易于发生分化或衰竭的HSC的自我更新、分化、迁移、凋亡等方面发挥作用，进而促进HSPC的体外扩增。

发明内容

本发明旨在从化合物库中筛选得到体外扩增人造血干细胞效果良好的小分子化合物白杨素，并确定其体外扩增效果最佳的作用浓度，在此条件下体外培养人造血干细胞，以达到体外扩增造血干细胞的目的。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供了白杨素在人造血干细胞体外扩增中的用途。

白杨素的结构为：

在该用途中，白杨素在扩增培养基中的浓度为1-10μM，更优选地，白杨素在扩增培养基中的浓度为2.5μM。

本发明还提供了一种人造血干细胞扩增培养基，包括白杨素。

优选地，该人造血干细胞扩增培养基还包括条件性培养基。

优选地，在该人造血干细胞扩增培养基中，白杨素的浓度为1-10μM。更优选地，白杨素的浓度为2.5μM。

优选地，该条件性培养基的配方是：Iscove's Modified Dulbecco's Medium+10％FBS+100ng/mL SCF+100ng/mL TPO+100ng/mL Flt3L+1％P/S。

本发明还提供了一种扩增人造血干细胞的方法，采用上述的人造血干细胞扩增培养基对人造血干细胞进行培养。

优选地，所述人造血干细胞为脐带血造血干细胞，更优选地，接种的密度为5×10⁴细胞/mL。

优选地，所述培养的条件为：37℃，5％CO₂恒温培养箱中培养7天。