[发明专利]一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基

说明书

本发明公开了一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基。本发明所提供的用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞培养基是配制特殊无血清培养基，利用该培养基对骨与软组织肿瘤来源的实体瘤细胞进行体外悬浮培养，可以保证肿瘤细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。利用本发明方法得到的骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞培养物可用于多种细胞水平体外实验、二代测序、构建动物模型、构建细胞系等等。可预见，这种培养方法在骨与软组织肿瘤实体瘤的研究和临床诊断治疗领域具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养方法基。

背景技术

骨与软组织肿瘤是严重危害人类健康及生命的疾病，近年来发病率逐渐上升，原发恶性骨肿瘤多见于青少年和中年人，常见的是骨肉瘤、尤文肉瘤、软骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、脊索瘤等。常见的软组织恶性肿瘤是滑膜肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤等。骨与软组织肿瘤发病率占恶性肿瘤发病率约1％，但其种类较多，致使不规范诊疗很普遍，当前各临床指南均推荐软组织肉瘤采用临床试验的治疗方式。

尽管世界各国的科研和医疗机构对骨与软组织肿瘤的病因以及发生发展过程的研究都有很大力度的投入，但是人类对这种疾病仍然知之甚少。骨与软组织肿瘤是一类复杂疾病，其发生、发展是一个动态的过程，涉及到诸多信号分子相互作用，形成了一个复杂的分子调控网络，同时还受到外界环境因素的影响。骨与软组织肿瘤的病因和发生发展过程有很强的个体差异性，不能一概而论。因此将骨与软组织肿瘤原代细胞培养物作为模型进行个体化精准研究是骨与软组织肿瘤研究领域乃至骨与软组织肿瘤诊断治疗领域的趋势。

现有的原代肿瘤细胞培养技术主要有2D培养，3D培养，重编程培养等几类，这些方法都不同程度的面临培养周期极长，培养成功率低，杂细胞难以去除等问题。

发明内容

为了有效解决上述技术问题，本发明提供了一种新的骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞培养技术及配套试剂，本发明配制特殊的无血清培养基，利用悬浮培养体系对骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞进行体外培养，保证肿瘤细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。

第一方面，本发明要求保护一种用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基。

本发明所要求保护的用于培养骨与软组织肿瘤实体瘤原代细胞的培养基由抗菌抗真菌剂三抗(青霉素-链霉素-两性霉素B)、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、人重组蛋白IGF-I、人重组蛋白BDNF、ITS-X(Insulin,Transferrin,Selenium,Ethanolamine Solution)、N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine)、N-2Supplement、Y-27632和Advanced DMEM/F12培养基组成。其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL(如100U/mL)；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL(如100μg/mL)；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL(如250ng/mL)；所述HEPES的终浓度为8-12mM(如10mM)；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(如1％，％表示体积百分含量)；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白IGF-I的终浓度为50-100ng/mL；所述人重组蛋白BDNF的终浓度为50-200ng/mL；所述ITS-X的终浓度为1％(体积百分含量)；所述N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine)的终浓度为0.5-2mM；所述N-2Supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；余量均为Advanced DMEM/F12培养基。