[发明专利]一种表面活性剂曲拉通X-100的高效液相检测方法

说明书

本发明公开了一种曲拉通X‑100的高效液相检测方法，采用反相C18色谱柱、ELSD检测器，流动相是甲醇和水的混合溶液，采用等度洗脱。本方法进样5～20ul，能够有效检出曲拉通X‑100，最低检出浓度为0.5μg/ml，HPLC谱基线平稳，不发生漂移。本发明能够用于曲拉通X‑100的含量测定，具有灵敏度高，良好的线性关系，重现性好，精确度和准确度高的优点，在工业分析及产品配方研究等方面具有重要研究价值。

技术领域

本发明涉及工业分析技术领域，具体涉及一种曲拉通X-100的高效液相检测方法。

背景技术

曲拉通X-100(英语：Triton X-100)是一种非离子型表面活性剂，可通过溶解细胞膜上的脂质成分溶解免疫细胞化学中的细胞膜,使抗体进入细胞与抗原结合。带有一个亲水性的聚乙二醇链(n常为9或10)和一个亲脂性的烃基基团(4-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基基团)。曲拉通X-100在水中不解离,在溶液中稳定性高，不易受强电解质无机盐类的影响，能与生物膜中的磷脂等脂质结合形成可溶性复合物；疏水端也能与膜蛋白的疏水区结合形成复合物，溶解于溶液中。

作为一种使用率高的表面活性剂，检测曲拉通X-100可用液相色谱进行分离，再用紫外检测器进行检测，但由于曲拉通X-100其分子在紫外光波长范围内吸收较弱，所以此方法的检测灵敏度不高，且操作较为繁琐，准确度一般。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离效果好，精密度和准确度高，而且操作安全简易，处理方便快捷，适合高通量筛选及精准定量的表面活性剂曲拉通X-100高效液相检测方法，以解决上述常规检测方法中检测灵敏度不高、操作繁琐、准确度一般的问题。

为了解决上述问题，本发明提供了一种表面活性剂曲拉通X-100的高效液相检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：

精密称取适量曲拉通X-100对照品，用流动相溶解并定容成具有一定浓度梯度的多个对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：

精密称取适量供试品，用流动相超声溶解并定容，如溶液混浊用0.22μm滤膜过滤得到供试品溶液；

(3)测定：

将所述多个对照品溶液以及供试品溶液进行液相色谱测定，记录色谱图，根据多个对照品溶液的图谱数据和浓度数据制备线性相关工作曲线，代入供试样品的图谱数据计算并得出供试品溶液浓度，完成了曲拉通X-100含量的测定。

作为优选的方案，所述步骤(1)中，对照品溶液的数量为5个，且对照品溶液的浓度依次为20、40、60、80、100μg/ml。

作为优选的方案，所述步骤(3)中，测定的色谱条件如下:

色谱柱采用反相C18色谱柱；

检测器采用ELSD检测器；

流动相包括流动相A和流动相B；流动相A是甲醇；流动相B是水；且甲醇与水的体积比为90：10。

作为优选的方案，所述的色谱柱柱长为250mm。

作为优选的方案，所述色谱柱的柱温控制在30～40℃。

作为优选的方案，所述ELSD检测器的雾化温度为40～45℃，蒸发温度为55～60℃，载气压力为25～30psi。

作为优选的方案，所述流动相的流速为1.0ml/min。

作为优选的方案，进样量为5～20μl。