[发明专利]一种用于食管鳞癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开一种用于食管鳞癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，属于生物医学技术领域，血清蛋白标志物为P53、GNA11、GNAS、PTEN、ACVR1B、FBXW7、EGFR、PDGFRA、SRSF2、MEN1、DAXX或CASP8基因编码的蛋白中的任意一种或两种以上的联合。本发明基于癌症驱动基因在肿瘤发生和发展中所起的作用，定制138个癌症驱动基因编码的人类蛋白质芯片，共包含180个人源重组蛋白质，用以筛选潜在的可用于诊断或其他表征癌症的标志物，先通过蛋白质芯片初步筛选出食管鳞癌的早期检测血清标志物，再经过ELISA间接法实验进行验证，最终筛选出可用于食管鳞癌早期筛查和诊断的一组食管鳞癌联合血清蛋白标志物，用于辅助食管鳞癌的临床诊断，具有较好的参考价值。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域。

背景技术

食管癌(esophageal carcinoma，EC)是人类常见的消化道恶性肿瘤之一，从组织类型上，食管癌主要分为食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)和食管腺癌，根据世界卫生组织下属国际癌症研究所发布的全球肿瘤流行的最新数据(Globocan 2018)显示，2018年全球食管癌发病57.2万例，位居恶性肿瘤发病的第7位；同期全球食管癌死亡50.9万例，位居恶性肿瘤死亡的第6位，在全球不同地区食管癌的发病率可相差2-3倍。中国是全球食管癌发病率最高的五大地区之一，世界上食管癌新发病例中大约53％为中国人，根据最新的肿瘤统计数据显示，中国的食管癌的发病率居恶性肿瘤发病的第6位，死亡率居恶性肿瘤死因的第4位，2015年中国有24.6万食管癌新发病例，有18.8万因食管癌死亡病例，其中，80％以上的食管癌患者都为食管鳞癌患者。食管癌早期大多起病隐匿，症状多不典型或无症状，易被忽视，而当患者出现进行性吞咽困难等典型症状时，往往已到癌症的中晚期，丧失了最佳的治疗时机。

目前，手术、放疗、化疗是包括食管癌在内的肿瘤的常用治疗手段，对早期食管癌患者而言，主要采取以手术为主、以术前或术后放化疗为辅的根治性治疗方式，对丧失手术治疗时机的中晚期食管癌患者，主要采取放疗或化疗的治疗方式。当前临床上广泛应用的食管癌检测方法为上消化道内窥镜检查，但内镜检查因其操作具有侵袭性的特点，具有一定痛苦，缺乏依从性和普及运用的可能；而食管X线钡餐检查和CT影像扫描也因各自的局限性，而不适合在大规模人群中筛查。基于目前临床上食管癌的筛查方法存在的不足，如果能寻找出具有理想敏感度和特异度的食管癌标志物，并且检测手段价格低廉、便于进行高危人群的筛查，这将能创造巨大的社会价值，在医疗资源和经济价值方面均可节省，而且可提高患者的生存率和生存时间。

在食管癌生物标志物领域，国内外众多学者已进行了大量的研究和探索，目前临床上亦常用一些传统的肿瘤标志物用于食管癌的诊断，如癌胚抗原、癌抗原125、癌抗原199等，但这些肿瘤标志物在食管癌诊断中的灵敏度和特异度均不高，尤其对早期食管癌患者的诊断价值更有限。近年来，在人类肿瘤学的研究领域内，已经发现癌症患者血清中含有一组独特的诱发自身抗体反应的细胞蛋白，被称为肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen，TAA)，其诱导产生的抗体称为抗TAA-抗体(autoantibody)。这一概念的提出对食管癌早期诊断研究指引了一个新的方向。已有研究显示食管癌患者血清中存在不同类别的抗TAAs自身抗体，可能就是食管癌患者针对食管上皮细胞癌变过程中的某些细胞内抗原免疫反应的结果。众多研究亦为抗TAAs自身抗体用于食管癌早期诊断提供了依据和可行性，但基于肿瘤发生过程的复杂性，单一的诊断指标用于肿瘤诊断的能力相对较差，一般不能满足临床上肿瘤诊断的需求，如研究显示，单一的一种抗TAAs自身抗体在食管癌患者血清中出现的频率非常低，一般不超过20％，限制了单一一项抗TAA自身抗体在肿瘤诊断中的应用。研究发现，通过联合使用一组“精心筛选”出来的抗TAAs自身抗体组合进行肿瘤的诊断，可在保证肿瘤诊断特异度的同时，大大提高肿瘤诊断的灵敏度，多项抗TAAs自身抗体组合联合应用于食管癌早期诊断的研究亦支持此学说。