[发明专利]一种外泌体组合物、其制备方法及应用

说明书

本发明提供一种外泌体组合物、其制备方法、以及在护肤或生发类皮肤美容产品中的应用，所述外泌体组合物包括外泌体和药学上可接受的载体，外泌体为单层细胞外泌体、细胞球外泌体、或二者的组合。本发明能够有效将外泌体输送至皮肤真皮层，并保持其生物活性，更有效地调节皮肤和毛囊分泌生长因子和基质的能力，最大程度地实现改善肌肤和毛囊问题，达到更为持久的效果，并且最大程度地减少了皮肤组织的损伤，更为安全。

技术领域

本发明涉及医疗美容领域，具体涉及一种外泌体组合物、其制备方法及应用。

背景技术

外泌体是细胞主动分泌的囊泡，含有与细胞来源相关的微小RNA以及蛋白等物质，可进入受体细胞内，参与细胞间的信息交流以及需要重要的生理和病理过程，具有与其来源细胞相似的功能。外泌体直径为100纳米左右，且为磷脂双分子层结构，极易与表皮细胞融合，进而通过微小RNA等生物活性物质调节细胞的活性。

为了收集足够的外泌体，需要进行细胞扩大培养。但是，随着细胞传代次数的增加，会出现细胞衰老和生长缓慢的状态，细胞分泌的外泌体也随之发生变化，例如其中的蛋白质和微小RNA成分，导致其生物活性大大降低。

如何培养及获取高活性的外泌体，并利用其特殊的生物活性进而转化为安全、有效的产品，成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明创造性地提出一种外泌体组合物、其制备方法、以及在护肤或生发类皮肤美容产品中的应用，并经大量实验数据证实了该方法和产品效果的可靠性。下文将对本发明内容进行详细描述。

根据本发明的一方面，提供一种外泌体组合物，其包括外泌体和药学上可接受的载体。其中，所述外泌体为单层细胞外泌体、细胞球外泌体、或二者的组合。所述单层细胞外泌体或细胞球外泌体来自成纤维细胞，毛囊乳突细胞，脂肪干细胞，胚胎干细胞，造血干细胞，脐带血干细胞，以及皮肤、脂肪、骨髓来源的间充质干细胞中的一者或多者。

在一些实施方式中，单层细胞外泌体通过以下方式获得：将成纤维细胞、毛囊乳突细胞、脂肪干细胞、胚胎干细胞、造血干细胞、脐带血干细胞、或者皮肤、脂肪、骨髓来源的间充质干细胞进行低代数细胞的贴壁扩大培养，至细胞融合率达90％以上后，收集单层细胞外泌体。

在一些实施方式中，细胞球外泌体通过以下方式获得：将经多次传代后呈现衰老表型的成纤维细胞、毛囊乳突细胞、脂肪干细胞、胚胎干细胞、造血干细胞、脐带血干细胞、或者皮肤、脂肪、骨髓来源的间充质干细胞传代至超低吸附培养瓶中，培养成细胞球，收集细胞球外泌体。

在一些实施方式中，通过以下方法收集单层细胞外泌体或细胞球外泌体：将单层细胞或细胞球置于无血清的培养基中培养，收集上清液并除去细胞及其他杂质，得到单层细胞外泌体或细胞球外泌体。

在一些实施方式中，所述单层细胞外泌体或细胞球外泌体中均表达外泌体标志蛋白CD63，CD81和CD9。

根据本发明的另一方面，还提供一种外泌体的制备方法，包括以下步骤：

将成纤维细胞、毛囊乳突细胞、脂肪干细胞、胚胎干细胞、造血干细胞、脐带血干细胞、或者皮肤、脂肪、骨髓来源的间充质干细胞进行低代数细胞的贴壁扩大培养，至细胞融合率达90％以上后，通过以下方法收集单层细胞外泌体：将细胞置于无血清的培养基中培养，收集上清液并除去细胞及其他杂质，得到单层细胞外泌体。

根据本发明的另一方面，还提供一种外泌体的制备方法，包括以下步骤：

将经多次传代后呈现衰老表型的成纤维细胞、毛囊乳突细胞、脂肪干细胞、胚胎干细胞、造血干细胞、脐带血干细胞、或者皮肤、脂肪、骨髓来源的间充质干细胞传代至超低吸附培养瓶中，培养成细胞球，通过以下方法收集细胞球外泌体：将细胞球置于无血清的培养基中培养，收集上清液并除去细胞及其他杂质，得到细胞球外泌体。