[发明专利]一种基于FcγRⅢa的嵌合基因及其用途

权利要求书

1.一种基于FcγRⅢa的嵌合基因，其特征在于，所述嵌合基因包括依次串联的FcγRⅢa信号肽、FcγRⅢa细胞外区域、CD8α跨膜区域和胞内信号传导结构域，所述FcγRⅢa细胞外区域直接与CD8α跨膜区域连接。

2.根据权利要求1所述的嵌合基因，其特征在于，所述FcγRⅢa信号肽具有如SEQ IDNO:8所示的氨基酸序列，其编码基因序列如SEQ ID NO:3所示；

优选地，所述FcγRⅢa细胞外区域具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，其编码基因序列如SEQ ID NO:4所示；

优选地，所述CD8α跨膜区域具有如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，其编码基因序列如SEQ ID NO:5所示。

3.根据权利要求1或2所述的嵌合基因，其特征在于，所述嵌合基因还含有Kozak序列；所述Kozak序列如SEQ ID NO:2所示；

优选地，所述胞内信号传导结构域由共刺激分子和细胞活化信号拼接而成；

优选地，所述共刺激分子为CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3或CD83中的任意一种或至少两种的组合，优选为CD28或4-1BB中的任意一种或两种的组合，进一步优选为4-1BB；

优选地，所述4-1BB具有如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，其编码基因序列如SEQ IDNO:6所示；

优选地，所述细胞活化信号为CD3ζ信号传导结构域；

优选地，所述CD3ζ信号传导结构域具有如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，其编码基因序列如SEQ ID NO:7所示。

4.根据权利要求1-3之一所述的嵌合基因，其特征在于，所述嵌合基因是由Kozak序列、FcγRⅢa信号肽、FcγRⅢa细胞外区域、CD8α跨膜区域、共刺激分子和CD3ζ信号传导结构域依次串联拼接而成，所述FcγRⅢa细胞外区域直接与CD8α跨膜区域连接，不含有CD8α铰合区；

优选地，所述嵌合基因具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

5.一种重组表达载体，其包含如权利要求1-4之一所述的嵌合基因。

6.权利要求1-4之一所述的嵌合基因的基因整合方式包括：逆转录病毒、腺病毒、慢病毒、单纯疱疹病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、杆状病毒、脂质体转染、直接注射、睡美人转座子系统、mRNA转染、mRNA电转等，优选地为慢病毒和腺相关病毒。

7.一种细胞，其表达如权利要求1-4之一所述的嵌合基因或含有如权利要求5所述的重组表达载体；

优选地，所述细胞为T细胞、NK细胞或DC细胞中的任意一种；优选地，

所述T细胞为中心记忆T细胞、效应记忆T细胞或效应T细胞中的任意一种；

优选地，所述NK细胞为原代培养的NK细胞或NK92细胞系。

8.根据权利要求7所述的细胞在制备预防和/或治疗和/或辅助治疗恶性肿瘤或者病毒感染性疾病的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述细胞与单克隆抗体联合使用；

优选地，所述单克隆抗体为CD20、CD52、Her-1/2、EGFR、VEGF、CD117或PD-1中的任意一种或至少两种的混合物。