[发明专利]一种确定厌氧颗粒污泥最适保存温度的方法

权利要求书

1.一种确定厌氧颗粒污泥的最适保存温度的方法，其特征在于，所述方法是利用流式细胞术测定不同温度保存的厌氧颗粒污泥中微生物的细胞活性状态，将其中细胞活性状态最接近厌氧颗粒污泥中试运行时的细胞活性状态时保存的温度确定为最适保存温度；

不同温度为-20℃、4℃、20℃；

所述利用流式细胞术测定细胞活性状态的方法包括如下步骤：

(1)厌氧颗粒污泥测试样液的制备：用缓冲液稀释厌氧颗粒污泥样品，并加入半胱氨酸，混合均匀后过滤，取沉淀物；再用缓冲液稀释，同时加入半胱氨酸混合均匀，其中，半胱氨酸相对缓冲液的添加量不低于0.8-2.0mg/mL；过滤取沉淀物，使用添加了半胱氨酸的预冷缓冲液吹洗细胞，重复离心和清洗，再取上清液作为样品，使用适量10x Annexin VBinding Buffer混匀制得，其中，预冷缓冲液中半胱氨酸的浓度为0.8-2mg/mL；

(2)置于流式细胞仪测定各样液的细胞活性状态；

所述厌氧颗粒污泥微生物细胞活性状态的测定包括活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞和死细胞的含量测定；

所述流式细胞仪测定各样液的细胞活性状态是在对照FITC Annexin V组加入0.5μlPI染色剂，对照PI组加入0.5μl FITC Annexin V，检测组加入0.5μl FITC Annexin V和0.5μl PI，混匀后室温下进行避光孵育，之后于流式细胞仪上机检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液是 pH为6.8-7.2的磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液与厌氧颗粒污泥的稀释体积比为8～15：1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述半胱氨酸相对缓冲液的浓度为1.0mg/mL。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述尼龙膜的孔径为10～20μm。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述上清液样品与10x AnnexinVBinding Buffer的混合体积比例为1：2～4。

7.一种快速启动厌氧颗粒污泥工程的方法，其特征在于，所述方法是预先利用权利要求1-6任一所述的方法确定最适保存温度，在最适保存温度下，将培养成熟的厌氧颗粒污泥置于保存基质中进行保存，活性恢复后即可启动厌氧颗粒污泥工程。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述保存基质的COD为6000-8000mg/L，pH为5.8±0.2，COD：N：P为200-500:5:1。

9.一种污水处理的方法，其特征在于，所述方法是利用权利要求7所述方法启动厌氧颗粒污泥工程。