[发明专利]一种对间充质细胞标记和示踪方法

说明书

本发明公开了一种对间充质细胞标记和示踪方法，包括以下方法步骤，S1,将含有目标基因的间充质细胞转入到营养培养基中，诱导细胞进行多次分裂；S2，然后向培养液中加入甘油或二甲亚砜保护剂，置于液氮中，渗透压控制250～325mmol/L；S3，然后切取间充细胞置于100％葡萄糖中10s，充分浸透后膜变为半透明状，然后进行振摇3min；S4，利用荧光染料对其进行充分标记；S5，采用同位素示踪方法进行示踪。本发明的方法采用了多种荧光染料进行标记，整体灵敏度高，方法简便，简化了实验过程，定位定量准确，符合生理条件，同时同位素示踪方法能快速进行定位，并且辐射作用小，准确检测，整个方法较为科学效率，值得推广。

技术领域

本发明涉及医疗细胞工程技术领域，尤其是一种对间充质细胞标记和示踪方法。

背景技术

间充质细胞是分化程度很低的细胞，核大，卵椭圆，核仁明显，胞质呈弱嗜碱性。细胞质内除含有一定数量的线粒体之外，还有少量的粗面内质网、游离核糖体、高尔基体及散在的溶酶体和脂粒等。间充质的间质是无色透明的液体，细胞质内除含有一定数量的线粒体之外，还有少量的粗面内质网、游离核糖体、高尔基体及散在的溶酶体和脂粒等。间充质的间质是无色透明的液体。有很强的分裂和分化能力，在胚胎发育的过程中不仅是各种结缔组织的共同祖先，而且分化和发育成血管的内皮及平滑肌等其他种类的组织。在成年的动物的结缔组织中仍然可以看见一些具有发育潜力的间充质细胞。MSCs是干细胞家族的重要成员，可分化为脂肪、骨、软骨、心肌等多种组织细胞，在修复骨骼、软骨及受损心脏细胞，治疗炎症和免疫系统疾病方面具有很大潜力。然而，目前在美国使用MSCs进行临床治疗的数百个病例中，结果喜忧参半：有的病人反应良好，有的病人则没有反应。要弄清其原因，研究人员需要在这些细胞进入人体后对其进行跟踪，看它们是否被移植到了合适位置。而要做到这一点，需利用超顺磁性氧化铁对比剂对细胞进行标记，并用磁共振成像技术对病人成像。

目前传统的对间充质细胞的标记方法和示踪方法，效率较低，耗时较长，并且准确性较低，针对以上，在这里我们提出一种对间充质细胞标记和示踪方法。

发明内容

本发明针对背景技术中的不足，提供了一种对间充质细胞标记和示踪方法。

本发明为解决上述技术不足，采用改性的技术方案，一种对间充质细胞标记和示踪方法，包括以下方法步骤，S1,将含有目标基因的间充质细胞转入到营养培养基中，诱导细胞进行多次分裂；

S2，然后向培养液中加入甘油或二甲亚砜保护剂，置于液氮中，渗透压控制250～325mmol/L；

S3，然后切取间充细胞置于100％葡萄糖中10s，充分浸透后膜变为半透明状，然后进行振摇3min；

S4，利用荧光染料对其进行充分标记；

S5，采用同位素示踪方法进行示踪。

作为本发明的进一步优选方式，步骤S4中，荧光染料标记法是使用某些能够结合到细胞膜或细胞内不同组织上的荧光染料进行观察，常用的主要有PKH26、DAPI、Dil、CFSE和荧光蛋白。

作为本发明的进一步优选方式，所述荧光蛋白标记技术是利用基因载体将荧光蛋白基因导入待标记细胞，通过筛选获得表达荧光蛋白的细胞，可通过荧光显微镜直接观察，而不需反应底物，荧光蛋白为可自发产生荧光的蛋白质，主要包括绿色荧光蛋白和其衍生物黄色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白，以及红色荧光蛋白；所述绿色荧光蛋白基因具有高效、稳定、无毒、易于检测特性，能在活细胞中直观地观察其表达，可较快筛选其修饰的细胞。