[发明专利]一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6的菌液制备及应用

说明书

本发明所述的一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW‑6的菌液制备及应用，本发明选取的甲基营养型芽孢杆菌菌株来源保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的甲基营养型芽孢杆菌，保藏登记号为：CGMCCNo.6793，本发明菌剂的制备是在特定的发酵培养基和工艺条件下，主要包括:原种筛选‑‑确定出发菌株—制备液体种子液‑‑放大发酵—超滤浓缩‑‑制备200亿活孢子菌液/ml,本发明所述的甲基营养型芽孢杆菌LW‑6对营养要求低，抗逆性强，生长繁殖快，具有定值和竞争能力强，杀菌效果明显。本发明具有防治棉花枯黄萎病的功能，用浸种处理和滴灌处理防治黄萎病防效可达81.2%，枯萎病防效可达81.0%。本发明中的甲基营养型芽孢杆菌LW‑6作为棉花枯黄萎病的生物防治菌剂，从源头上断绝环境污染以及化学农药残留，且具有更好的防治效果。因此本发明在新的生物农药研发方面和应用方面都具有广阔的理论和时间意义。

技术领域

本发明涉及一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6的菌液制备及应用，属于微生物技术领域或者生物防治技术领域。

背景技术

棉花枯黄萎病是世界性的重要病害之一，自1935年由引进美国斯字棉种而传入中国，并逐年传播扩散。目前枯黄萎病的危害已成为棉花生产上的第一大病害，该病害属于土壤带菌和传播的根部病害，防治困难，其发生严重影响棉花的产量和质量，是棉花可持续生产的主要障碍之一。目前，国内外有两种主流防治该病的方法，一是主要依靠种植耐病品种，但由于抗性种质资源缺乏导致抗病育种进展缓慢，生产上缺乏真正有效的抗病品种；二是化学防治，但是化学防治措施控制该病的效果甚微，此方法同时带来严重的环境污染和化学农药残留。

对此，本发明一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌液是以生物防治的方式来防治棉花枯黄萎病，并且结合滴灌再补充水肥的条件下加入有益微生物甲基营养型芽孢杆菌LW-6进行该病害的防治，本发明相比化学药剂和种植耐病品种的方式，都具有不同的优势，另一方面本发明的生防菌剂对环境无污染，也不会产生抗药性。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6的菌液制备及应用。该菌液制备工艺独特，包括原种筛选--确定出发菌株—制备液体种子液--放大发酵—超滤浓缩,该菌液含有的甲基营养型芽孢杆菌LW-6活孢子数高，可达200亿/ml，具有对棉花枯黄萎病更加高效的生物防治功能，用滴灌处理防治黄萎病防效可达81.2％，枯萎病防效可达81.0％。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

采用如下方法制备：一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6的菌液制备及应用:

(1)将甲基营养型芽孢杆菌LW-6原种接种于琼脂淀粉平板培养基上，35℃下培养72h，显微镜下检测，选择中央芽孢形成均一，两端着色清晰的大菌落作为发酵出发菌落；

(2)将所述步骤(1)所述的发酵出发菌落接种于液体种子培养基，装液量为：500ml的摇瓶装100ml种子液，培养温度35℃，转速200rpm条件下培养72h，得到发酵种子液；

(3)将步骤(2)得到的发酵种子液，按照9％的接种量接入发酵培养基，在发酵罐中进行发酵培养，培养条件为：罐压0.07Mpa，风量1:0.8vvm，转速260rpm，培养温度为35℃，直到发酵罐中发酵液中的活孢子数达200亿/ml以上、芽孢量大于或等于92 ％时即可终止发酵。

(4)将步骤(3)得到的发酵液进行超滤浓缩,去掉40％水分，其特征为：：串联使用孔径分别为0.005um、0.001um和1nm的3个超滤膜组件，将发酵液在35℃、压力0.3MPa条件下依次同时进行连续超滤处理，超滤时间4h,得到一种用于棉花枯黄萎病生物防治的甲基营养型芽孢杆菌LW-6液体菌剂,活孢子数≥200亿/ml.