[发明专利]一种能治疗阿尔茨海默病的间充质干细胞制剂及其应用

说明书

本发明提供了一种能治疗阿尔茨海默病的间充质干细胞制剂及其应用，所述间充质干细胞为人的脐带血间充质干细胞，本发明所使用的脐带血间充质干细胞作为治疗阿尔茨海默病制剂的原料进行制备，其通过与聚多巴胺修饰四氧化三铁纳米粒子结合，给药至阿尔茨海默病模型小鼠体内，显著改善了小鼠记忆能力，为阿尔茨海默病的药物开发提供了新方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种能治疗阿尔茨海默病的间充质干细胞制剂及其应用。

背景技术

间充质干细胞是干细胞家族中一种具有分化成为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞的多种分化潜能的细胞亚群，并且经过连续传代及冻存后仍具有多向分化潜能。目前，由于间充质干细胞具有较强的分化潜能及可自体移植等优点，已被广泛用于干细胞治疗药物的研发。阿尔茨海默病是一种具有隐匿性和进行性的神经退行性疾病，其多发于中老年人群并且长久以来对于中老年人群的正常生活都有着很大的诟病。而目前世界上对于阿尔茨海默病的治疗方法大多仅限于预防与延缓病情。纳米生物材料在近年来都被试图用作新药的开发，原因在于其具有很好的生物相容性以及高度靶向性。四氧化三铁纳米生物材料在与细胞孵育培养后，表现出了比较好的生物相容性。针对以上所述，那么如何发明出一种能治疗阿尔茨海默病的间充质干细胞制剂及其应用，这成为我们需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能治疗阿尔茨海默病的间充质干细胞制剂及其应用，解决了背景技术中所提出的问题。

为解决上述问题，本发明提供如下技术方案：一种能治疗阿尔茨海默病的间充质干细胞制剂及其应用，包括以下应用方法，

S1、提取小鼠的脐带血间充质干细胞并培养；

S2、制备聚多巴胺修饰的四氧化三铁纳米粒子并用以后续实验；

S3、种植人神经母细胞瘤细胞于六孔培养板中，加入OA对细胞进行凋亡诱导，以此对细胞系进行间充质干细胞的trans-well诱导，使用CCK-8试剂盒检测细胞生存情况，使用间充质干细胞进行trans-well的SH-SY5Y细胞系相较未进行trans-well的细胞系死亡数量减少；

S4、种植人神经母细胞瘤细胞于六孔培养板中，加入OA对细胞进行凋亡诱导，以此对细胞系进行间充质干细胞的trans-well诱导，利用western-

blot检测细胞内蛋白水平表达情况，使用间充质干细胞进行trans-well的细胞系相较未进行trans-well的细胞系蛋白表达水平更趋正常；

S5、将间充质干细胞以及经四氧化三铁纳米材料修饰过的间充质干细胞使用细胞荧光染色材料进行染色，后通过尾静脉将药物注射于阿尔茨海默病模型小鼠体内，通过使用荧光成像系统对染色细胞进行定位，相较于正常的MSC细胞，经过四氧化三铁纳米材料修饰的MSC细胞更多的聚集于脑部，表明四氧化三铁纳米材料具有良好的靶向性；

S6、将间充质干细胞与四氧化三铁纳米生物材料于同一培养皿中孵育，后通过尾静脉将干细胞药物注射于阿尔茨海默病模型鼠中，通过western-blot实验检测小鼠脑部各种标志性蛋白的表达情况，干细胞药物处理能明显改善阿尔茨海默病模型小鼠脑内TAU、BDNF、APP、SYN等蛋白的表达水平；

S7、利用水迷宫实验平台对完成注射周期的小鼠进行行为学测试，通过检测小鼠到达固定隐藏平台的时间分析其记忆能力，注射间充质干细胞的模型鼠相较未注射干细胞的小鼠到达隐藏平台的时间短且能表现出更强的记忆能力，说明间充质干细胞对阿尔茨海默病模型小鼠的记忆能力有很明显的改善作用；

S8、利用阿尔茨海默病模型小鼠组织提取RNA，通过反转录获得小鼠cDNA，后利用在线软件设计TAU、BDNF、APP、SYP等蛋白基因的引物，使用Real-time PCR进行基因鉴定。