[发明专利]一种优化脐带间充质干细胞培养液

说明书

本发明公开了一种优化脐带间充质干细胞培养液，取含有核糖核苷的α‑MEM基础培养基，然后称取100～150mg/L的丙酮酸钠、2000～3000mg/L的Hepes、142～292mg/ml的谷氨酰胺、2～5ul/L 2‑ME、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素，一起溶解于注射用水中，将pH调制为7.2～7.4，采用0.2μM平板过滤器过滤后，4℃保存，在使用前加入10～20％胎牛血清，即为完全培养液，本发明使脐带间充质干细胞在体外连续培养中有细胞遗传学稳定性良好、纯度高、活性高、增殖速度快的特点，对脐带间充质干细胞的体外分离纯化、培养扩增有重要的意义。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种优化脐带间充质干细胞培养液。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，是动物有机体和各种组织器官的起源细胞。新近的研究表明，众多成体组织中(如骨髓、肌肉、胃肠道、皮肤、视网膜、外周及中枢神经系统等)均存在间充质干细胞。MSCs它来源广泛、易体外分离扩增，具有向三种胚层细胞分化的多向分化潜能；具有低免疫原性、不能刺激产生同种异体免疫反应、不被细胞毒性T细胞和NK细胞杀伤，“归巢”修复作用，肿瘤趋向性以及免疫调节作用。

研究表明，脐带间充质细胞主要来源于脐带华尔通胶(Wharton’S jelly)。UC-MSCs的优势在于：①脐带为分娩后的废弃物，取材方便，来源广泛，易于收集、保存、冷冻、不受伦理、道德及法律方面的争论与限制；②相对纯净，与干细胞输注相关的病毒和病原微生物感染率远低于骨髓移植；③人UC-MSCs含量丰富，较为原始，分化能力强，可在体外进行分离、培养，扩增迅速，且生物性能稳定，多次传代扩增仍能保持旺盛功能，可以为实验和临床提供充足的细胞来源；④人UC-MSCs不表达或低表达组织相容性标记，免疫原性低，异体移植无免疫排斥反应或反应较弱，不须经过严格配型即能使用，适宜于不同个体之间的移植；⑤UC-MSCs可直接获取于新生儿脐带，进行储存库长期保存，不存在对机体产生创伤。因此UC-MSCs已被当做是临床和科研工作中MSCs的一个更佳来源。

然而，无论哪一种组织来源的MSCs，要为组织工程、修复、肿瘤治疗载体和免疫调节提供种子细胞，都必须以高数量和高纯度的细胞为基础。

现存的问题在于，脐带间充质干细胞易于体外原代细胞的分离扩增培养，还存在脐带间充质干细胞在长期培养扩增中，细胞活性不好，细胞增殖慢，细胞传代次数少，干细胞生物学特性维持不好的问题。

发明内容

本发明的提供一种优化脐带间充质干细胞培养液。

本发明的方案是：

一种优化脐带间充质干细胞培养液，包括含有核糖核苷的基础培养基α

-MEM与添加物，所述基础培养基α-MEM包括下列成分及其含量如下：

作为优选的技术方案，所述基础培养基α-MEM包括下列成分及其含量如下：

作为优选的技术方案，所述添加物包括下列成分及其含量如下：

作为优选的技术方案，所述添加物包括下列成分及其含量如下：

本发明还提供了一种制备所述优化脐带间充质干细胞培养液的方法，取含有核糖核苷的α-MEM基础培养基，然后称取100～150mg/L的丙酮酸钠、2000～3000mg/L的Hepes、142～292mg/ml的谷氨酰胺、2～5ul/L 2-ME、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素，一起溶解于注射用水中，将pH调制为7.2～7.4，采用0.2μM平板过滤器过滤后，4℃保存，在使用前加入10～20％胎牛血清，即为完全培养液。