[发明专利]一种牛骨中胶原蛋白的提取方法

权利要求书

1.一种牛骨中胶原蛋白的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1破碎：将新鲜牛骨洗净后破碎至过50-80目筛，得牛骨粉；

S2速冻：将牛骨粉在零下10℃至零下30℃的条件下进行冷冻1-3h；

S3解冻：将牛骨粉置于容器中，用含酒石酸的水蒸汽喷淋10-15min；所述含酒石酸的水蒸汽中酒石酸质量分数为30-40％；所述每100g牛骨粉的喷淋速率为500-700mL/s；

S4脱脂脱钙：将牛骨粉按料液比1：(2-5)的质量比置于复合酶液中，在20-35℃、100-200转/min的条件下摇床发酵培养5-10h，再将牛骨粉按料液比1：(1.8-3.6)的质量比置于鼠李糖乳杆菌液中，在相同条件下摇床发酵培养5-10h，过滤，取固形物为牛骨粉；

S5变频电解：将牛骨粉按料液比1：(1.5-2.5)的质量比置于质量分数40-60％的氨基酸溶液，在电流密度为15-25A/cm² 的条件下变频电解20-25min，静置后，按添加量为4-7mg/L加入改性壳聚糖，在30-40℃的条件下搅拌10-20min，然后置于转速为4000-6000r/min的离心机中离心8-15min，取上清液浓缩3-5倍，冷冻干燥即得胶原蛋白；

所述复合酶液中酶的总活力为4000-5000U/mL，复合酶由脂肪酶与磷脂酶接种量比为(3-7)：1；

所述氨基酸为异亮氨酸与丝氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、精氨酸中任一种按1：(0.2-0.5)的质量比组成。

2.如权利要求1所述牛骨中胶原蛋白的提取方法，其特征在于，所述复合酶液是将复合酶接种于改性米糠多糖溶液中搅拌10-15min。

3.如权利要求2所述牛骨中胶原蛋白的提取方法，其特征在于，所述改性米糠多糖是将米糠多糖加入水中配成质量浓度为8-12％的米糠多糖溶液，在温度为35-45℃、转速为200-500r/min搅拌下向米糠多糖溶液中同时滴加质量分数为15-25％的柠檬酸和质量分数为30-40％的茶多酚溶液，所述柠檬酸的滴加量为米糠多糖溶液重量的0.8-1.6％，所述茶多酚的滴加量为米糠多糖溶液重量的0.3-0.7‰，滴加完毕后继续以转速为200-500r/min搅拌反应30-40min。

4.如权利要求1所述牛骨中胶原蛋白的提取方法，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌液是将鼠李糖乳杆菌冻干菌粉采用MRS液体培养基在30-35℃条件下活化1-4h后，得悬浮液；将悬浮液在45-55℃下热胁迫处理10-25min；所述鼠李糖乳杆菌活化液总活菌数为(1.7-3.7)×10⁷ cfu/mL。

5.如权利要求4所述牛骨中胶原蛋白的提取方法，其特征在于，所述MRS液体培养基配方为：蛋白胨6-8g，枯草芽孢杆菌提取物2-4g，葡萄糖22-27g，乙酸钠1-3g，柠檬酸二铵3-4g，吐温80 1-2mL，MgSO₄·7H₂O0.1-0.3g，MnSO₄·4H₂O0.03-0.04g，K₂HPO₄ 2-4g，琼脂粉12-16g，水1100-1300mL。

6.如权利要求5所述牛骨中胶原蛋白的提取方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌提取物的制备方法为：

(1)将枯草芽孢杆菌菌丝体与温度为75-84℃的热水按1：(2-5)的质量比混合搅拌20-25min；

(2)将步骤(1)所得物降温至25-35℃，并将pH值调节到6.5-7.0，然后按加酶量0.03-0.07‰的量加入蛋白酶和按加酶量0.05-0.08‰的量加入纤维素酶，进行水解反应8-12h；

(3)将步骤(2)得到的水解液加热至75-85℃，灭活0.5-2h，然后分离，分离后的液体经浓缩或喷雾干燥后即得所述枯草芽孢杆菌提取物。

7.如权利要求1所述牛骨中胶原蛋白的提取方法，其特征在于，所述改性壳聚糖的制备方法为：将壳聚糖和氧化铁在温度为40-50℃条件下搅拌10-20min，得改性壳聚糖。