[发明专利]一种基于HPLC波长切换技术同时测定三黄片中多种成分含量的方法

说明书

本发明公开了一种基于HPLC波长切换技术同时测定三黄片中多种成分含量的方法，涉及药品的检测方法技术领域，按照如下步骤同时对黄芩苷、盐酸小檗碱、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚7种成分进行定性和定量分析：混合对照品溶液的制备；供试品溶液的制备；高效液相色谱分离检测；供试品定性和定量分析。利用HPLC波长切换技术，黄芩苷波长切换在280nm处检测，盐酸小檗碱长切换在264nm处检测，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚波长切换在254nm处检测；洗脱条件：流动相A乙腈,流动相B磷酸水溶液，0～10min：15％A，85％B；20min：25％A,75％B；30min：40％A,60％B；42min：55％A,45％B；50～60min：80％A，20％B。操作简便，检测灵敏度高，测定结果更加准确。

技术领域

本发明涉及药品的检测方法技术领域，具体涉及一种基于HPLC波长切换技术同时测定三黄片中多种成分含量的方法。

背景技术

三黄片，由大黄、盐酸小檗碱、黄芩浸膏混合而成，具有清热解毒，泻火通便功效。主治三焦热盛，目赤肿痛，口鼻生疮，咽喉肿痛，心烦口渴，尿黄便秘。三黄片是一种经典的中成药，疗效确切、物美价廉，深受老百姓的喜欢。为提高市售三黄片的质量，国家食品药品监督管理总局多次对该药品进行了修订，制订检验补充方法和检验项目，增加土大黄苷和盐酸巴马汀的检查项目。目前，全国已经有十几家药厂在生产三黄片，产品配方相对稳定及生产工艺相对合理。但由于生产厂家众多，质量参差不齐，因此，加强和提高质量控制方法显得尤为重要。

目前，采用高效液相色谱(HPLC)分开测定了大黄素和大黄酚、盐酸小檗碱、黄芩苷的含量，测定成分少，且样品前处理繁琐，分析时间长，可操作性不强。HPLC对于测定药物中的化学成分具有方便、快速的优点，有报道采用HPLC同时测定三黄片中的3味中药有效成分的方法，但未见采用HPLC波长转换法同时定量分析三黄片中7种有效成分的方法。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种基于HPLC波长切换技术同时测定三黄片中多种成分含量的方法，能同时对黄芩苷、盐酸小檗碱、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚7种成分进行定性和定量分析，步骤如下：

混合对照品溶液的制备：分别称取黄芩苷、盐酸小檗碱、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的对照品，精密称定，加入甲醇制成每1mL含黄芩苷207.2μg、盐酸小檗碱196.7μg、芦荟大黄素101.1μg、大黄酸100.1μg、大黄素100.9μg、大黄酚100.7μg和大黄素甲醚102.3μg的对照品贮备液；分别精密量取上述7个对照品贮备液适量，加入甲醇制成每1mL含黄芩苷51.80μg、盐酸小檗碱24.59μg、芦荟大黄素2.022μg、大黄酸2.002μg、大黄素2.018μg、大黄酚2.014μg和大黄素甲醚1.023μg的混合对照品溶液。

供试品溶液的制备：取三黄片，除去包衣，研细，取0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

(3)高效液相色谱分离检测：采用C18反向色谱柱；流动相A乙腈,流动相B磷酸水溶液；采用梯度洗脱，波长切换技术测定；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；检测波长为280nm、265nm和254nm，其中黄芩苷波长切换在280nm处检测，盐酸小檗碱长切换在264nm处检测，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚波长切换在254nm处检测；

(4)供试品定性和定量分析：采用步骤(1)配制的混合对照品溶液，按步骤(3)高效液相色谱分离检测的条件，进样，绘制标准曲线，得到7种成分对照品的回归方程；每个供试品按照步骤(2)进行处理后，按照步骤(3)高效液相色谱分离检测的条件分别进样分析，供试品峰与对照品峰保留时间比对定性，供试品峰面积带入相对应的标准曲线回归方程定量。