[发明专利]一种定量检测牛奶中雌二醇的量子点免疫层析试纸

说明书

本发明公开了一种定量检测牛奶中雌二醇的量子点免疫层析试纸，该试纸由样品垫、标记物垫、层析膜、缓冲垫相互重叠1‑2mm依次粘贴在PVC底板上制得，所述层析膜为承载有检测线和质控线的硝酸纤维素膜，所述检测线包被有雌二醇抗原、质控线包被有羊抗鼠抗体；所述标记物垫上承载有偶联有雌二醇抗体的量子点。当牛奶中含有雌二醇时，流经T线位置会与T线包被的抗原竞争结合标记物垫上的抗体，从而改变检测的荧光强度来进行定量检测。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种定量检测牛奶中雌二醇的量子点免疫层析试纸。

背景技术

雌二醇(Estrodiol，E2)是一种天然的雌激素，也是一种典型的内分泌干扰物，在自然界广泛分布。雌二醇能够促进动物生长发育，提高动物的产奶量，因此被广泛用于肉鸡、猪、奶牛等禽畜饲养，然而违规用药或未按照休药期生产动物性食品，易造成畜禽产品(肉、奶)中E2的残留，进而通过食物链危害人类健康，目前奶制品中雌激素含量呈逐年递增的模式，不仅能引起儿童性早熟，也可能会增加女性患乳腺癌的风险，因此建立雌二醇残留的快速检测技术对保障人群健康具有重要意义。

免疫层析技术(Immunostrip assay，ICA)是一种建立在抗原与抗体特异性结合基础上的检测方法，该方法不仅快速、简便、灵敏度高，而且耗时短，适合于现场快速检测。

目前针对雌二醇药物残留的检测方法有很多，包括以高效液相色谱、液相色谱与质谱联用、毛细管电泳分析法等为代表的大型仪器检测法，其灵敏度高，但需要使用大型仪器，检测用时较长，前处理复杂；以酶联免疫吸附法、胶体金试纸条为代表的传统快速检测方法，操作简便、用时较短，但具有抗基质干扰能力低、材料易受损等局限性；以化学发光免疫法为代表的新型检测方法，检测灵敏度高，结果易观察，但过程较复杂，生产成本较高。因此，为了维护奶制品市场的安全性和检测需求，开发一种简单、准确、可实现即时即效的检测方法，逐渐受到广泛的重视。量子点免疫层析技术是以量子点作为示踪标志物应用于免疫层析法中，它一方面利用了量子点的独特荧光作为观测信号，具有灵敏度高、快速的优点，另一方面利用了免疫层析技术的简便、特异性强、费用低等优点结合于一体，用于精准的定量检测奶制品中雌二醇的含量。目前国内对此方面研究较少，具有很大的创新性，适用于大批量筛查原料奶中雌二醇的含量，对快检技术的发展具有一定的推动作用。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种检测牛奶中雌二醇的量子点免疫层析试纸，通过研究活性材料与量子点标记与固性材料结合、活性材料浓度优化、原材料筛选等一系列技术，建立一种雌二醇量子点免疫层析的检测方法，并对减少基质干扰及简化前处理方法进行研究，进一步提高其处理方法的简便性，实现样本不处理直接上样。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种检测牛奶中雌二醇的量子点免疫层析试纸，由样品垫、标记物垫、层析膜、缓冲垫相互重叠1-2mm依次粘贴在PVC底板上制得，所述层析膜为承载有检测线和质控线的硝酸纤维素膜；其中，所述检测线包被有雌二醇抗原、质控线包被有羊抗鼠抗体；所述标记物垫上承载有偶联有雌二醇抗体的量子点。

所述层析膜粘贴在PVC底板上，缓冲垫粘贴在层析膜一侧，相互重叠部分为1～1.5mm；所述标记物垫和样品垫粘贴在层析膜另一侧，相互重叠部分为1～1.5mm，所有部分均紧密粘贴在PVC底板上。

进一步地，所述样品垫选用棉浆纸，所述缓冲垫和标记物垫选用玻璃纤维素膜。

进一步地，所述偶联有雌二醇抗体的量子点是将活化后的量子点与雌二醇抗体进行偶联后，加入牛血清白蛋白溶液封闭得到。

上述层析试纸的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，制备标记物垫：

1)向玻璃纤维素膜滴加第一处理试剂，烘干，得到预处理的玻璃纤维素膜；