[发明专利]提高中华羊茅-内生真菌菌株PA次生代谢产物震颤素含量的方法

说明书

本发明提供提高中华羊茅‑内生真菌菌株PA次生代谢产物震颤素含量的方法，包括以下步骤：(1)将中华羊茅‑内生真菌菌株PA的菌丝接种到平板PDA培养基上进行黑暗培养；(2)接种至M102种子液体培养基中继续培养；(3)接种至M104T培养基中进行发酵培养，离心收集滤液；发酵培养的条件为：黑暗培养，初始pH8‑10，装液量25‑100mL，接种量0.5％‑5％，接种时间14d‑28d，转速120r/min‑160r/min，温度20℃‑30℃。本发明利用中华羊茅‑内生真菌菌株PA的发酵液为材料，通过优化发酵条件，提高菌株代谢产物活性物质的产率，为微生物农药的研发提供基础资料。

技术领域

本发明涉及提高中华羊茅(Festucasinensis)-内生真菌(sp.)菌株PA次生代谢产物震颤素含量的方法。

背景技术

内生真菌是指在其生活史的部分或全部阶段生活于植物组织内，对植物没有引起明显病害症状的真菌(Siegeletal.,1987；李秀璋等,2014)。研究表明内生真菌可产生具有生物活性的次生代谢产物生物碱，分别是以震颤素(lolitremB)为代表的吲哚双萜类(lndolditerpene)、以波胺(peramine)为代表的吡咯并吡嗪类(pyrrolopyrazine)、以麦角新碱(ergonovine)和麦角酰胺(ergine)为代表的麦角碱类(ergotalkaloids)、以黑麦草碱(loline)为代表的饱和吡咯类化合物(pyrrolizidine)等(高嘉卉和南志标,2007；徐瑞等,2012；李秀璋等,2015)。四大类生物碱均对某些线虫和食草昆虫具有一定的毒性。据统计超过77种禾草被认定为携带有禾草内生真菌(师茜等,2018)，已分离鉴定出45种禾草内生真菌(Leuchtmannetal.,2014；金文进等,2015；Shymanovichetal.,2017；Mihwaetal.,2018)，并且其至少对79个种的害虫表现出较明显的抗性(李秀璋等,2015；Xiaetal.,2018)。说明禾草内生真菌资源丰富，有作为潜在生防因子的潜力。

众多研究人员发现纯培养条件下，禾草内生真菌亦可以产生一些生物碱等次生代谢产物(Blankenshipetal.,2001；Yueetal.,2000；高嘉卉,2007)，其对害虫具有较高毒力作用(ChristensenandLatch,1991；Faeth,2002；张雪兵等,2010；Schardletal.,2013)，说明其可以作为生防资源，但是含量较低(高嘉卉,2007)。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了提高中华羊茅(Festucasinensis)-内生真菌(sp.)菌株PA次生代谢产物震颤素(LolitremB)含量的方法。通过单因素实验和正交实验优化发酵条件，来提高菌株代谢物产量，缩短发酵时间，降低耗能，减少污染。

为了实现上述技术目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供提高中华羊茅(Festucasinensis)-内生真菌(sp.)菌株PA次生代谢产物震颤素含量的方法，包括以下步骤：

(1)将中华羊茅(Festucasinensis)-内生真菌(sp.)菌株PA的菌丝接种到平板PDA培养基上进行黑暗培养；

(2)接种至M102种子液体培养基中继续培养；

(3)接种至M104T培养基中进行发酵培养，离心，收集滤液；

其中，步骤(3)中，所述发酵培养的条件为：黑暗培养，初始pH8-10，装液量25-100mL，接种量0.5％-5％，接种时间14d-28d，转速120r/min-160r/min，温度20℃-30℃。

作为优选，步骤(1)中，所述黑暗培养是在22℃下黑暗培养四周。

作为优选，步骤(2)中，所述培养是在22℃，转速200r/min的条件下黑暗培养四周。