[发明专利]一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：

所述试剂R2由反应液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其反应液由第二缓冲液构成，其保存液由甘氨酸、第二稳定剂、第二防腐剂构成，胶乳微球抗体偶联物由小胶乳微球、大胶乳微球、生物素、链霉亲和素、脂联素单抗、脂联素多抗以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成，各组分的浓度为：

2.根据权利要求1所述的一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的第二缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液等中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂R1和试剂R2中的第一稳定剂和第二稳定剂均包括酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或几种以上混合物。

5.根据权利要求1所述的一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的表面活性剂包括吐温20、曲拉通X-100、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或几种以上混合物。

6.根据权利要求1所述的一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一防腐剂和试剂R2中的第二防腐剂包括叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。

7.根据权利要求1所述的一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的小胶乳微球所选粒径为15-85nm，大胶乳微球所选粒径为270-630nm。

8.根据权利要求1所述的一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的脂联素单抗为小鼠单抗；脂联素多抗为羊多抗，兔多抗中的一种。

9.根据权利要求1所述的一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于：所述R1试剂pH在5.90-8.90之间；所述R2试剂pH在6.00-8.00之间。

10.一种脂联素-胶乳增强免疫比浊试剂盒的制备方法，其特征在于：

包括如下步骤：A)、试剂R1制备：

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入第一缓冲液、氯化钠、第一稳定剂、表面活性剂、聚乙二醇6000和第一防腐剂，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，调整PH值5.90-8.90之间并定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

B)、试剂R2制备：

B1反应液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入第二缓冲液，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到5.50-6.50之间，并定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

B2保存液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，边搅拌边投入甘氨酸、第二稳定剂和第二防腐剂，搅拌20-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.00-8.00之间，继续搅拌5-10分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；

B3胶乳微球抗体偶联物的制备：

步骤一：将小胶乳微球用反应液稀释到0.05-2.0％的浓度，与链霉亲和素按1:2-1:5比例透析过夜结合；

将脂联素多抗以反应液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,与生物素按1:1-1:3比例透析过夜结合；

将上述的胶乳-链霉亲和素和生物素-脂联素多抗按照0.5:1-4:1比例进行混合；

将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以反应液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬；

步骤二：大胶乳微球用反应液稀释到0.05-2.0％的浓度，脂联素单抗以反应液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,将两者按0.5:1-4:1比例混匀；

将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以反应液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬；

步骤三：将步骤一中偶联成功的胶乳和步骤二中偶联成功的胶乳按2:1-5:1比例混合均匀，装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识为制备好的R2。