[发明专利]一种猫乳叶片组织培养方法

说明书

本发明公开了一种猫乳叶片组培方法，以猫乳的叶片进行组织培养，而不是传统的采用植物的茎作为外殖体，能够提高猫乳叶片组织培养繁殖技术。本试验主要研究不同种类不同浓度的生长素结合对猫乳叶片出愈率的影响，研究得出最适合猫乳叶片的组培条件，猫乳的组培繁殖研究对于猫乳的推广与应用具有重要的意义。

技术领域

本发明公开了一种农业植物繁殖方法，具体涉及植物猫乳的叶片组织培养方法。

背景技术

猫乳(Rhamnella frangulodes Maxim.Weberb)属于鼠李科猫乳属，猫乳又称长叶绿柴、鼠矢枣、七里头，落叶灌木或小乔木。猫乳的生长环境比较阴凉，耐阴耐旱，喜欢在松散，排水良好的土壤，温暖潮湿的环境中，绝大部分生长在海拔1100m以下的山坡及道路两旁。

猫乳是具有观赏性植物，它的果实是核果，形状似圆柱形，叶柄很短；5-18朵腋生聚伞花序，5月至7月开花；花瓣长圆形，短茎，先端全缘；花盘薄，肉质，附着在萼管内；果实颜色鲜艳外形可爱，果实的颜色由黄色变为红色或者橘红色，通过阳光照晒后变为黑色或紫黑色。猫乳果实生长周期较长在生长期的大多数时间里整棵树红色与黄色相间，通过绿色枝叶的映衬下非常美丽，到深秋季节的时候叶色变为金黄色，是秋季观叶的优良树种。猫乳树形独特，多枝多叶，适应环境能力强，比较耐阴，是园林绿化和庭院常见的见习树种，为植物群落创造良好的条件。猫乳作为药用茶叶，开发前景广阔，在植物扦插上该植物有研究且扦插成活率低。

裴小娜在《西藏猫乳化学成分及抗风湿性关节炎活性研究》中提到猫乳植物还具有一定的药用价值。猫乳的主要用途是当作药材，对疥疮、疲劳等症状的治疗有一定的疗效，同样还具有补脾益肾的作用。猫乳的植物外皮还可以作为绿色染料。在江苏省丘陵山区地带的百姓采集猫乳的植物幼嫩枝叶制作野茶，经过冲泡的野茶色泽碧绿，经过长时间的泡制颜色不发生改变，隔夜的茶水仍然入口清香，受到很多饮用者的喜欢。

猫乳属的植物有9个品种，产东亚，我国主要分布于西南部至中部，国内外的研究只对猫乳和西藏猫乳2个品种进行了研究。目前对西藏猫乳的研究主要是在化学成分和和药用价值方面，甄月惠等研究人员在《猫乳在北方园林中的应用前景》一文中提到对猫乳进行探索，研究的内容只是对猫乳植物的生长习性和栽培管理的方法进行阐述。

愈伤组织是一种极其敏感细胞团，当它受到刺激后，植物周围具有可持续和剧烈分裂的细胞，是组织培养中的形态结构，接种的外植体培养在一段时间内形成愈伤组织碎片。陈淑仪在《诱导胡萝卜愈伤组织实验的探究》中提到：愈伤组织的形成可以是植物的任何器官且必须是活的薄壁细胞。《胡萝卜愈伤组织建立中的几个问题探讨》中作者胡蓉认为其发生顺序为：外植体经激素诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞增殖为薄壁组织而形成愈伤组织。

发明内容

发明目的：本发明提供一种猫乳树的组培方法，不同于以往的采用茎作为外殖体，本发明是研发了一种方法，以猫乳叶片进行组织培养繁殖。

技术方案：本发明所述的猫乳叶片组织培养方法，是考察不同种类不同浓度的生长素结合对猫乳叶片出愈率的影响，讨论出最适合猫乳叶片的组培条件。

猫乳叶片组培方法，包括如下步骤：

(1)获取5-6月份新鲜的猫乳叶片；

(2)用毛刷刷去叶片表面上的柔毛得到预处理后的猫乳材料；

(3)将预处理后的猫乳材料进行表面消毒；

(4)将消毒好的植物叶片在无菌环境下用剪刀切去四周的伤口部分并剪成块状，接种到启动培养基上，最后将接过苗的启动培养基放置于培养室中培养；培养室温度设定为20-30℃，光照时间设定为12-14h/d，光照强度设定为1800-2200lx。

步骤(3)中所述表面消毒是先使用酒精消毒，接着用氯化汞消毒。