[发明专利]一种新型聚乙二醇-聚γ丁内酯两嵌段共聚物纳米载药微球的制备方法

说明书

本发明公开了一种新型聚乙二醇‑聚γ丁内酯(PEG‑PBL)两嵌段共聚物纳米载药微球的制备方法。本发明提供的PEG‑PBL共聚物纳米载药微球粒径小、分布窄、载药量高、长效缓释可减少给药次数。另外，根据生物学评价结果，证明聚乙二醇‑聚γ丁内酯两嵌段共聚物纳米载药微球具有优异的生物相容性和抗癌活性。本发明提供的新型聚乙二醇‑聚γ丁内酯两嵌段共聚物纳米载药微球的制备方法简单、易于规模化生产，在药物缓释领域具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于高分子药物释放载体制备技术领域，具体涉及一种新型聚乙二醇-聚γ丁内酯两嵌段共聚物纳米载药微球的制备方法。

背景技术

纳米药物载体是指具有纳米尺度的用于药物释放的载体。利用纳米药物载体可以实现对化疗药物、蛋白和核酸药物等的携载。目前，多种材料被广泛的应用于构建纳米药物载体且部分已处于商品化或临床研究阶段。两亲性嵌段共聚物由于其独特的结构可在水中自组装成纳米微球，可有效改善疏水药物在水中的溶解度。

两亲性嵌段共聚物中的亲水嵌段主要是聚氧乙烯(PEO)或称为聚乙二醇(PEG)等，疏水嵌段主要是聚乳酸(PLA)、聚己内酯(PCL)、聚乙交酯(PGA)、聚乳酸乙醇酸酯(PLGA)、聚戊内酯(PVL)和聚氨基酸等。此类载体具有强载药能力、稳定性好、体内循环时间长和靶向输送等特点。

聚γ丁内酯(PBL)是一种以γ丁内酯为单体开环聚合得到的具有优异生物相容性和降解性能的高分子聚酯材料，聚γ丁内酯与聚γ羟基丁酸(P₄HB)具有完全相同的化学结构，聚γ羟基丁酸已经通过美国食品药品监督管理局(U.S. Food and Drug Administration，U.S.FDA)批准，并应用于手术缝合线和补片等领域。然而，迄今为止，仅有一例基于γ丁内酯开环聚合制备多嵌段共聚物作为植入器械药物控释涂层的应用研究(US 7897168B2)。因此，研发一种新型聚乙二醇-聚γ丁内酯两嵌段共聚物纳米载药微球，在理论研究和工业应用方面均具有重要的意义和价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型聚乙二醇-聚γ丁内酯(PEG-PBL)两嵌段共聚物纳米载药微球的制备方法，操作简单、省时高效、易于产业化。同时，进行了细胞相容性评价以及抗癌活性实验。

本发明提供的制备新型聚乙二醇-聚γ丁内酯两嵌段共聚物纳米载药微球的制备方法，通过溶剂挥发法制备，包括步骤：

(1)将聚乙二醇-聚γ丁内酯两嵌段共聚物、药物和挥发性有机溶剂搅拌混合成均一油相溶液A；

(2)向溶液A中加入去离子水，经微射流匀质机多次匀质后，得均匀乳液 B；

(3)乳液B室温下搅拌挥发除去有机溶剂获得到载药微球悬液C；

(4)将悬液C高速冷冻离心，离心所得固体冷冻干燥，即制备得基于 PEG-PBL的纳米载药微球。

(5)药物释放是在pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液(PBS溶液)中于37℃下进行7 天，在相应时间点取出释放介质，并补充新鲜PBS溶液。

(6)培养L929细胞，进行细胞相容性评价。利用MTT法检验L929细胞与纳米微球共培养后的相对生长率，分别在24h、48h和72h，测量蓝紫色结晶甲瓒的吸光度值，然后通过公式计算得到细胞相对生长率。

(7)培养A549细胞，进行抗癌活性实验。利用MTT法检验A549细胞与载药纳米微球共培养后的相对生长率，设置一系列载药纳米微球的浓度梯度，检验不同浓度下载药微球的抗癌活性。通过测量蓝紫色结晶甲瓒的吸光度值，然后通过公式计算得到细胞相对生长率，由此评价载药纳米微球的抗癌活性。

上述方法中，所述步骤S1中聚乙二醇-聚γ丁内酯两嵌段共聚物如式(Ⅰ) 所示，