[发明专利]一种快速纯化血清中IgG和IgE的方法

说明书

本发明涉及一种快速纯化血清中IgG和IgE的方法，该方法包括：构建串联亲和纯化系统，首先利用Protein G琼脂糖凝胶与血清混合孵育，以获得结合成分A和流穿成分B；再利用Protein L琼脂糖凝胶与所述流穿成分B混合孵育，以获得结合成分C和流穿成分D；接着，利用甘氨酸缓冲液洗脱所述结合成分A，收集洗脱液，用HEPES‑Na缓冲液中和，以获得纯化后的IgG溶液；最后，利用甘氨酸缓冲液洗脱所述结合成分C，收集洗脱液，用HEPES‑Na缓冲液中和，以获得纯化后的IgE溶液。该纯化方法能够在1小时内从少量血清样品中分别纯化得到IgG和IgE，从而为食物过敏原的检测提供材料。

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，具体涉及一种快速纯化血清中IgG和IgE的方法。

背景技术

食物过敏已成为全球性的食品安全问题，不仅造成巨大的经济损失，还危害消费者健康，显著降低生活质量。准确检测食物过敏原是食物过敏研究的基础，也是让患者了解自己应该避开那些食物，以防过敏性休克。

目前，食物过敏大都是由IgE引起的I型超敏反应，过敏个体血清中的IgE能够特异性识别并结合食物过敏原。基于此，IgE已成为食物过敏原检测的主要工具。另一方面，食物成分进入人体后还可能引起常规免疫反应，产生特异性IgG；然而IgG并不直接参与食物过敏反应，其存在会干扰基于IgE的食物过敏原检测。血清中IgE相对含量较低且存在大量性质类似的IgG干扰，因此利用粗血清进行过敏原检测容易出现假阳性和假阴性，而利用从血清中纯化的IgE进行检测可以规避这一问题。然而，由于IgE与IgG性质相似，且血清样品往往较为珍贵，常规的纯化方法(如色谱法等)不但需要花费数天的时间，还会造成大量浪费，且无法达到理想的分离效果。

相关技术中，有文献报道能够利用IgE特异性抗体进行血清中IgE的纯化。但是，抗体成本高昂且难以稳定保存；此外，抗体本身也是一种污染源，会造成纯化产物的二次污染。因此，纯化血清中IgE的方法有待改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的目的在于提供一种快速纯化血清中IgG和IgE的方法。该纯化方法能够在1小时内从少量血清样品中分别纯化得到IgG和IgE，从而为食物过敏原的检测提供材料。

为此，在本发明的一方面，本发明提出了一种快速纯化血清中IgG和IgE的方法，包括以下步骤：

(1)将Protein G琼脂糖凝胶与血清混合孵育，以获得结合成分A和流穿成分B；

(2)将Protein L琼脂糖凝胶与所述流穿成分B混合孵育，以获得结合成分C和流穿成分D；

(3)将所述结合成分A用甘氨酸缓冲液洗脱，收集洗脱液，洗脱液用HEPES-Na缓冲液中和，以获得纯化IgG溶液；

(4)将所述结合成分C用甘氨酸缓冲液洗脱，收集洗脱液，洗脱液用HEPES-Na缓冲液中和，以获得纯化IgE溶液。

根据本发明的一种快速纯化血清中IgG和IgE的方法，通过串联亲和纯化技术，先用Protein G琼脂糖凝胶将血清中的IgG完全结合，之后用Protein L琼脂糖凝胶将IgE结合，再分别洗脱两个结合成分的物质，可从少量血清样本中依次获得IgG和IgE纯品，可以作为抗原和过敏原检测的工具；并且整个纯化过程在1小时内可完成，纯化速度快。

另外，根据本发明上述实施例提出的一种快速纯化血清中IgG和IgE的方法，还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，在所述步骤(1)中，Protein G琼脂糖凝胶与血清的体积比为2:1～5:1。

根据本发明的实施例，在所述步骤(1)中，混合孵育的温度为4℃，孵育时间为30～120min。