[发明专利]一种检测癌胚抗原的荧光比率型光谱分析方法及其应用

权利要求书

1.一种检测癌胚抗原的荧光比率型光谱分析方法，其特征在于，所述分析方法包括如下步骤：

（1）长余辉纳米棒ZGO:Sr NRs的制备及表面癌胚抗原适配体修饰：

①长余辉纳米棒ZGO:Sr NRs的制备：将Zn(NO₃)₂、Sr(NO₃)₂固体加入到8-12 mL超纯水中混合搅拌均匀，并加入200-400 μL浓HNO₃，混合均匀后得到溶液1，随后将1-3 mL Na₂GeO₃溶液逐滴加入到上述所得溶液1中，用氨水调节溶液的pH值至7-11；在室温下搅拌1-2h后转入聚四氟乙烯水热反应釜中，在200-240℃下加热4-6h，升温速率为2-4 ℃/min；冷却至室温后，通过离心收集下层沉淀物，沉淀用超纯水至少洗涤三次，最后干燥研磨即得长余辉纳米棒ZGO:Sr NRs粉末；

②长余辉纳米棒ZGO:Sr NRs的氨基化：将上述所得ZGO:Sr NRs粉末分散于NaOH溶液中，室温下剧烈搅拌10-14h；离心收集下层沉淀，将其分散在N, N-二甲基甲酰胺试剂中，然后逐滴加入3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES试剂，在70-90 ℃水浴中加热搅拌24-26h，反应结束后离心收集产物，并均匀分散在超纯水中，得到氨基化ZGO:Sr NRs溶液；

③表面癌胚抗原适配体修饰：使用PBS缓冲溶液将癌胚抗原适配体CEA-Apta稀释，之后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺与N-羟基丁二酰亚胺的混合溶液EDC/NHS孵育30-40 min，孵育完成后加入步骤②中所得氨基化的ZGO:Sr NRs溶液，并在室温下振荡孵育5-6 h，反应结束后离心收集沉淀物，用超纯水至少清洗三次，最后将沉淀物重新均匀分散在PBS缓冲溶液中，即得浓度为0.6-1 mg/mL的检测探针ZGO:Sr/CEA-Apta溶液；

（2）ZGC@PDA的制备：

①将Ga(NO₃)₃、 Zn(NO₃)₂与Cr(NO₃)₃溶解在超纯水中剧烈搅拌混匀，用氨水调节溶液的pH值至7-11，搅拌30-50min后转入水热反应釜中，在200-240 ℃下反应10-12h后冷却至室温，离心分离取沉淀物，将沉淀物用超纯水洗涤，并置于烘箱中80-90℃下干燥4-6h并研磨，再转入坩埚中退火处理，待自然冷却后再次研磨至粉末，并分散溶解在超纯水中，即得ZGCNPs溶液；

②将步骤①中所得ZGC NPs溶液用Tris-HCl缓冲液稀释，在搅拌状态下，加入盐酸多巴胺溶液，室温下避光反应1-2h，反应结束离心取下层沉淀物，并用超纯水洗涤三次以上，最后将沉淀物重新分散在超纯水中，即得浓度为0.6-1mg/mL的ZGC@PDA溶液；

（3）癌胚抗原荧光比率型光谱分析方法构建：

将步骤（1）中所得ZGO:Sr/CEA-Apta 溶液与步骤（2）中所得ZGC@PDA溶液在PBS缓冲液中搅拌混匀，并在室温下孵育2-3 h，得到ZGO:Sr/CEA-Apta-ZGC@PDA混合溶液，将上述混合溶液分别等体积加入到具有不同浓度梯度的等体积的癌胚抗原CEA标准溶液中，室温下振荡孵育5-6h，之后使用254nm紫外灯照射，通过荧光光谱仪测试每组溶液的发光光谱，建立以癌胚抗原适配体CEA-Apta浓度对数为横坐标，以检测探针ZGO:Sr/CEA-Apta的恢复发光强度与参比探针ZGC@PDA的发光强度之间的比值为纵坐标的标准曲线。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤（1）①中所述浓硝酸的浓度为14-16 mol/L；Na₂GeO₃溶液的浓度为0.02-0.1 g/mL；其中，Zn(NO₃)₂与Sr(NO₃)₂的摩尔质量比为1.8-2.2:0.004-0.006。