[发明专利]一种香菇多糖的提取纯化方法

说明书

本发明公开了一种香菇多糖的提取纯化方法，由以下步骤组成：液体发酵、超声处理、脱色、酶‑碱法提取、冷冻干燥，本方法简化了提取纯化的处理过程，有效提高了香菇多糖的提取效率，提高香菇多糖的质量。

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种香菇多糖的提取纯化方法。

背景技术

香菇多糖是从香菇Lentinus edodes(Berk)Sing子实体中提取的多糖，具有抗肿瘤、抗病毒等活性。香菇多糖的药效活性与分子结构和分子量有关。研究表明，在香菇内提取的多糖中，仅当主链为β-(1,3)糖苷键时具有抗肿瘤活性，而侧链的β-(1,6)糖苷键可增强β-(1,3)糖苷键主链的药理活性；另外，研究者通过采用凝胶过滤法(HPLC)和拉曼光谱散射法测得香菇多糖的相对分子量较大，为40～80×10⁴，且具有β-三股绳状螺旋立体结构，当用脲或胍处理过后，香菇多糖的三维空间结构遭到破坏，抗肿瘤活性也随之消失。所以研究人员在制备香菇多糖时应尽可能保护具有良好药效的香菇多糖结构。

当前对香菇多糖的提取方法有很多，如回流提取、超声提取、微波提取、复合酶提取等，但是由于提取过程中方法本身存在的问题和技术手段存在缺陷，导致提取的多糖因分子量太小、三维空间结构遭到破坏或β-(1,4)糖苷键的存在导致了香菇多糖药效成分含量低、抗肿瘤效果不好的问题；此外，当前使用的纯化手段如醇析纯化、复合酶去蛋白、凝胶柱脱色素等方法由于选择性有限，致使纯化效果不理想、得到的香菇多糖存在有效多糖含量少，杂质多，且操作繁琐的问题。

针对这些问题，专利CN201811368332.X提供了一种香菇多糖的提取方法，在减压升温条件下提取香菇多糖，然后通过蛋白酶和纤维素酶的处理西除去杂质，通过醇析得到香菇多糖。此种方法得出的多糖提取率高，但是由于在减压升温操作下，香菇所处的则是高温环境，本质是利用高温加热提取香菇多糖，这会导致香菇多糖空间结构破坏，分子量减小，影响香菇多糖的活性。

专利CN201710445531.5提供的香菇香菇多糖提取方法重点在于对香菇多糖溶液的纯化，通过多次醇析得到香菇多糖，此方法得到的香菇多糖由于不经高热处理避免了空间结构的破坏而具有良好的抗肿瘤活性，但是此方法的提取率较低，且多次醇析处理不仅对试剂耗材要求高，还增加了后期处理的难度，不适用于大量生产。

专利CN201810438472.3提出了先将香菇粉碎后再用蒸汽爆破装置进行爆破，辅助微波提取法提取香菇多糖的办法，此方法提高了香菇多糖的提取效率，但是此方法在提取过程中对设备的要求较高，在纯化过程中的酶解、灭活、离心、脱色、脱蛋白的处理较为繁琐，在工业化生产中存在一定困难。

综上，尽管当前已有技术对香菇多糖提取中存在的问题进行了改进，但还存在着各自的不足，而随着香菇多糖在医药领域的应用越来越广泛，这些方法不能满足市场的需要，故本申请想要提供一种提取纯化方法，得到抗肿瘤活性好、杂质少、纯度高的香菇多糖。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了一种香菇多糖的提取方法。具体是通过以下技术方案来实现的：

一种香菇多糖的提取方法，包括如下步骤：

(1)液体发酵：①取2份1cm×1cm的香菇菌块于200ml液体培养基中，26～30℃条件下摇床发酵4～5天；②将步骤①所得发酵液与液体培养基按体积比1：10～15的比例在同样条件下发酵10～12天，所述摇床转速为120～150r/min；

(2)超声处理：将上一步骤中所得发酵物置于超声仪中超声温度为45～50℃下超声处理4～6h，超声频率为240～300W进行超声破碎处理后过滤，取续滤液；

(3)脱色：在续滤液中加入质量浓度为0.5％～2％的特制活性炭，并加入质量浓度为0.3～0.5％的表面活性剂，在35～40℃下脱色25～35min，收集脱色液；