[发明专利]一种卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因及应用

说明书

本发明的第一个目的在于提供一种卵形鲳鲹抗菌肽NK‑lysin基因及其编码蛋白。本发明的第二个目的在于提供含有所述卵形鲳鲹抗菌肽NK‑lysin基因的表达载体及利用该载体转化的重组菌株。本发明的第三个目的在于提供一种制备重组卵形鲳鲹抗菌肽NK‑lysin蛋白的方法。本发明的第四个目的在于提供所述卵形鲳鲹抗菌肽NK‑lysin基因的应用。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因 及应用。

背景技术

抗菌肽(Antimicrobial Peptides，AMPs)是一种基因编码，核糖体合成的小 于10kDa，具有总净正电荷的小分子多肽。AMPs是生物体先天性免疫防御系统 的重要组成部分，在免疫方面发挥重要作用。

近年来，抗菌肽的开发和应用研究已成为国内外饲料科学和药理学的研究热 点，在动植物转基因工程及药物开发领域具有广阔的应用前景。目前，在鱼类中 已经发现80多种抗菌肽，其中NK-lysin是鞘脂激活蛋白样蛋白(SALIP)家族 的成员，首次在猪毒性淋巴细胞中发现，是由细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和 自然杀伤(NK)细胞产生抗微生物阳离子蛋白，并储存在溶细胞颗粒中，具有 广谱抗菌性。

NK-lysin具有保守的鞘脂激活蛋白B结构域和六个半胱氨酸，六个半胱氨 酸形成三个分子内二硫键，可通过其螺旋结构在细胞膜中形成孔，使得微生物的 脂质双层膜以非特异性方式渗透。在大黄鱼、大菱鲆、罗非鱼等硬骨鱼类研究表 明，NK-lysin不仅对细菌、真菌具有抗菌活性，对病毒和寄生虫同样也具有生物 活性。

卵形鲳鲹(Trachinotus Ovatus)具有生长速度快，经济价值高，适合网箱养 殖等优点，已成为我国南方池塘和网箱养殖的主要品种，养殖年产量已超过10 万吨。然而，随着卵形鲳鲹养殖产业发展，再加上养殖环境日益恶化，卵形鲳鲹 养殖病害频发，常引起较高死亡率，严重制约了卵形鲳鲹养殖产业的可持续发展。 传统养殖过程中多采用抗生素进行治疗，但长期使用抗生素不但污染养殖环境， 同时还会导致病原体产生抗药性。因此，开发一种安全、高效的抗菌剂尤为重要。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因及其编码 蛋白。

本发明的第二个目的在于提供含有所述卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因的表 达载体及利用该载体转化的重组菌株。

本发明的第三个目的在于提供一种制备重组卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin蛋白 的方法。

本发明的第四个目的在于提供所述卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因的应用。

本发明的第一个目的通过以下技术方案实现：

一种卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

如SEQ ID NO.3所示为卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因的cDNA，其全长是通 过卵形鲳鲹转录组测序和基因组测序结果综合检索分析获得。

上述卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因的编码蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

表达上述卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因的编码蛋白的抗菌肽成熟肽的基因 序列是以卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因的全长双链cDNA为模板，经PCR方法 扩增获得，它来源于卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因的成熟肽区域所对应的的基 因片段，其为所述卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因的cDNA序列210bp至506bp (相当于第50至第147位氨基酸)的片段。