[发明专利]一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法有效
| 申请号： | 201910795469.1 | 申请日： | 2019-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN110501317B | 公开（公告）日： | 2020-11-17 |
| 发明（设计）人： | 孙健;杨秀荣;刘国永;赵佳会;卢沙沙 | 申请（专利权）人： | 中国科学院长春应用化学研究所 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N1/38 |
| 代理公司： | 长春众邦菁华知识产权代理有限公司 22214 | 代理人： | 周蕾 |
| 地址： | 130022 吉林*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 碱性磷酸酶 活性 荧光 检测 方法 | ||
1.一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：将4-羟基苯基磷酸钠水溶液分别与不同已知活性的碱性磷酸酶标准溶液在缓冲溶液中混合孵育，得到一系列混合溶液；
步骤二：在步骤一制备的一系列混合溶液中分别加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液，进一步混合孵育，进行荧光光谱测试；
步骤三：利用碱性磷酸酶标准溶液活性和荧光光谱强度的线性关系，绘制标准曲线；
步骤四：将4-羟基苯基磷酸钠水溶液与待测碱性磷酸酶溶液在缓冲溶液中混合孵育，得到待测碱性磷酸酶混合溶液；
步骤五：在步骤四制备的待测碱性磷酸酶混合溶液中加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液，进一步混合孵育，进行荧光光谱测试，得到待测碱性磷酸酶的荧光光谱强度；
步骤六：利用步骤三的标准曲线及步骤五测得的荧光光谱强度，计算得到待测碱性磷酸酶的活性。
2.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，碱性磷酸酶标准溶液的活性范围为：0～50mU/mL。
3.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤一和四中4-羟基苯基磷酸钠水溶液的浓度为0.1～1.5mM。
4.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤一和四中缓冲溶液是pH＝7.5～10.5的10～100mM Tris-HCl溶液，并含有MgCl2浓度为20～500μM。
5.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤一和四中孵育温度为20～37℃，时间为10～90min。
6.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤二和五中3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液的浓度为质量分数1％～5％。
7.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤二和五中孵育温度为20～37℃，时间为20～120min。
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