[发明专利]重组杆状质粒及其在表达PCV3 Cap蛋白、疫苗中的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及重组杆状质粒及其在表达PCV3 Cap蛋白、疫苗中的应用。本发明将PCV3 Cap基因正确插入杆状病毒载体，构建了pFBD‑P2C质粒，并获得穿梭质粒，通过脂质体转染的方法将穿梭质粒转染SF9昆虫细胞，获得重组杆状病毒，成功地利用昆虫表达系统表达了PCV3 Cap蛋白，所表达的蛋白分子质量约23KDa；间接免疫荧光试验和Western Blot结果表明，利用杆状病毒表达系统能够正确表达Cap蛋白，且Cap蛋白具有良好的抗原性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及重组杆状质粒及其在表达PCV3 Cap蛋白、疫苗中的应用。

背景技术

猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)为单链环状无囊膜DNA病毒，属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)，是迄今为止发现的最小动物病毒之一。在2016年猪圆环病毒3型(porcine circoviurs 3，PCV3)发现之前，PCV分为猪圆环病毒1型(porcine circoviurs 1，PCV1)和猪圆环病毒2型(porcine circoviurs 2，PCV2)两种血清型。PCV1最早于1974年在PK15细胞中被发现；PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(porcine multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原之一，具有较强的致病性。2016年，Palinski等借助宏基因组测序技术从暴发猪皮炎与肾病综合征(porcinedermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)疫情的美国某商品化猪场的患病猪中发现了一种新病毒，根据该病毒的基因组结构和遗传特性将其归类为新型圆环病毒，并命名为PCV3。PCV3基因组结构与PCV相似，为单股环状DNA，全长2000bp，包含3个主要开放阅读框(ORFs)，其中ORF1全长891bp，编码含有296个氨基酸的复制酶(Rep)；ORF2全长645bp编码含有214个氨基酸的衣壳蛋白(Cap)。另外还有一个开放阅读框ORF3全长693bp，编码230个氨基酸组成的蛋白，目前该蛋白功能未知。

自2016年美国首次报道PCV3后，亚洲及美洲等地陆续报道了PCV3。表明这种病毒可能已经在世界范围内传播。根据最近报道，PCV2和PCV3的混合感染在猪身上很常见。此外，有迹象显示，将PCV3与其他病原体(如PRRSV)混合感染可能会增加猪的致病性。在大多数报告中PCV3可能与PDNS、生殖功能衰竭、心脏、猪皮炎与肾病综合征、母猪繁殖障碍、多系统炎症、猪呼吸道疾病综合征、仔猪腹泻、仔猪先天性震颤等有关，在不同年龄和不同性别以及无明显临床发病症状的猪中均能检测到PCV3。此外，有报告显示猪只感染PCV3，没有任何明显的临床征状或症状。野猪对PCV3(无临床症状)的易感性也有报道。最近证实，4周龄和8周龄仔猪的PCV3感染可诱发PDNS样疾病的发生。根据对死胎仔猪精液、母猪初乳和组织中PCV3的检测，流产胎儿中PCV 3感染是由垂直传播引起的。

PCV3是一种新型的圆环病毒科病毒属病毒，其对养猪业的影响难以估计，但目前对PCV3尚无有效的防控措施。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种重组杆状质粒及其在表达PCV3 Cap蛋白、疫苗中的应用。本发明以PCV3的主要抗原蛋白Cap作为研究对象，通过Bac-to-杆状病毒表达系统进行PCV3 Cap基因表达研究，以期为后期PCV3诊断检测和新型疫苗研制奠定基础。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了重组质粒，包括2个PCV3 Cap基因和杆状病毒表达载体。

在本发明的一些具体实施方案中，所述杆状病毒表达载体为pFastBac^TM。