[发明专利]检测IVF-ET反复种植失败女性PBMC免疫功能异常的试剂盒、检测方法和制备方法

说明书

本发明公开了一种检测IVF‑ET反复种植失败女性PBMC免疫功能异常的试剂盒、检测方法和制备方法，涉及生物检测技术领域，具体包括多个带有荧光标记的单克隆抗体，单克隆抗体包括抗人CD3，CD4，CD25，CD127，CXCR5，CCR6，CXCR3，CCR4，CD56和CD94。分析人体外周血CD4+T细胞，NK细胞的16项免疫功能指标，利用该16项指标参数即可实现通过免疫功能监测IVF‑ET女性反复种植失败的风险率及预后。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种检测IVF-ET反复种植失败女性PBMC免疫功能异常的试剂盒、检测方法和制备方法。

背景技术

育龄期妇女胚胎种植，即体外受精-胚胎移植技术(in vitro fertilization andembryo transfer,IVF-ET)，临床医学一般称之为“IVF治疗”，也就是我们俗称的“试管婴儿”。经调研发现，中国大陆近二十年的“试管婴儿”成功率基本维持在30％～45％，相较于拥有“试管婴儿”高成功率的泰国、美国来说，我国大陆的“试管婴儿”失败率其实是很高的。

众所周知，“IVF治疗”中的关键环节为胚胎种植。而导致反复胚胎种植失败(repeated implantation failure,RIF)的原因多而复杂，母体方面因素包括子宫解剖结构异常、子宫内膜容受性低及母胚免疫异常等多个方面；胚胎方面因素则包括胚胎遗传物质缺陷、胚胎孵化不良、胚胎培养环境不良、胚胎移植操作不当。如何针对RIF的原因进行正确的干预尤为关键，其中对于解剖结构异常可采用手术进行矫正，为提高子宫内膜容受性可采用增加内膜厚度、抑制频繁宫缩、改善凝血功能、调整免疫状态、刺激内膜应答等，胚胎方面则需要筛选优质胚胎、辅助胚胎孵化、改善移植技巧。

近年来，领域内最新研究认为，育龄期女性自身的免疫功能状态的异常，在导致反复胚胎种植失败方面起到十分重要的作用。研究表明，过高的免疫反应是影响胚胎着床的不利因素，其病因包括子宫内膜孕酮受体减少、病原体感染、子宫内膜组织中细胞因子表达失衡、体内免疫细胞群紊乱等。

但是，迄今为止，还没有能对RIF患者进行免疫细胞功能进行全面定量分析、检测的技术或产品，临床上缺乏一个详细的能量化的、快速的且耗费较低的免疫功能检测评估方案，即，目前还没有针对RIF的免疫细胞功能评价方法，更没有可供参考的参数。该方法或参数的建立，在未来能为临床预判RIF患者IVF治疗失败的风险，以及对IVF治疗人群后期治疗方案的调整提供可靠依据。现有技术中检测免疫功能的方法多属于间接检测的方法，方法复杂，需要专门仪器设备，对分析人员要求极高，数据分析难度大，操作难度高，成本高，不利于推广应用。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种检测体外受精-胚胎移植反复种植失败女性的外周血单核细胞免疫功能异常的试剂盒。该试剂盒可以对体外受精-胚胎移植反复种植失败女性的外周血单核细胞免疫功能进行全面定量分析，检测。

本发明的第二目的在于提供一种试剂盒检测IVF-ET人群外周血单核细胞的免疫功能的方法。该方法操作简单，对分析人员要求较低，数据分析简单，操作难度低，成本低，有利于推广应用。

本发明的第三目的在于提供一种检测IVF-ET人群外周血单核细胞的免疫功能的试剂盒的制备方法。

本发明是这样实现的：

一种检测体外受精-胚胎移植反复种植失败女性的外周血单核细胞免疫功能异常的试剂盒，包括多个带有荧光标记的单克隆抗体，单克隆抗体包括如下抗体：

抗人CD3单克隆抗体，抗人CD4单克隆抗体，抗人CD25单克隆抗体，抗人CD127单克隆抗体，抗人CXCR5单克隆抗体，抗人CCR6单克隆抗体，抗人CXCR3单克隆抗体，抗人CCR4单克隆抗体，抗人CD56单克隆抗体和抗人CD94单克隆抗体。