[发明专利]RBP1基因在母猪卵巢颗粒细胞中的应用

说明书

本发明公开了RBP1基因在母猪卵巢颗粒细胞中的应用。本发明是以RBP1为研究对象，采用了分子和细胞生物学方法研究其在母猪卵巢颗粒细胞中的应用：通过ChIP‑Seq发现，在不同大小卵泡中RBP1基因启动子区的H3K4me3富集程度有显著差异；通过qRT‑PCR发现，在不同大小卵泡中RBP1基因的表达量有显著差异；通过促进或抑制母猪卵巢颗粒细胞中H3K4me3的程度发现促进H3K4me3程度可促进RBP1基因的转录，抑制H3K4me3程度可抑制RBP1基因的转录；通过超表达或干扰RBP1发现RBP1可促进母猪卵巢颗粒细胞增殖，抑制细胞凋亡。

技术领域

本发明属于细胞工程和基因工程技术领域，具体涉及RBP1基因在母猪卵巢颗粒细胞中的应用。

背景技术

卵泡是卵巢的基本结构和功能单位，其主要功能是排卵和分泌激素。卵泡内颗粒细胞的过度凋亡会诱导卵泡闭锁，降低雌性动物发情频率，从而影响雌性动物生产力。组蛋白是真核生物的染色质结构蛋白，碱性的组蛋白能够与带负电的DNA双螺旋结构扭结在一起，形成核小体，组蛋白翻译后修饰是一种类似调控染色质“开放”或“关闭”的独特模式，通过改变染色质结构，调控细胞核内基因的转录和表达，重新编程生命体的基因组，例如组蛋白甲基化能够参与配子发生、受精卵着床、早期胚胎植入等生物学进程。Berger等人已经证实组蛋白H3上第4号位赖氨酸三甲基化(Tri-methylation of Histone H3lysine 4,H3K4me3)是一个具有转录活性的典型染色质标记，H3K4me3能够通过改变组蛋白与DNA的结合能力，促进基因的转录，且H3K4me3结合在基因上的宽度与细胞识别种类相关，H3K4me3分布情况与基因的转录水平相关。

视黄醇结合蛋白1(Retinol-binding protein 1,RBP1)是视黄醇结合蛋白(RBPs)家族的一员，RBP1全长约10kb，有6个外显子，是维生素A的转运蛋白，通过协助转运维生素A发挥相应的生理功能。Li、Napoli等小鼠实验表明，RBP1基因能够促进肝细胞间视黄醇的酯化和转移，促进类视黄醇从细胞质向细胞核的转运，并影响核受体的配体占有率，因此RBP1是维持体内维生素A平衡的必要成分，参与维生素A的储存、代谢和信号传导途径，而RBP1基因突变会影响机体对维生素A的吸收、存储、转运等过程，改变维生素A在组织中的分布情况。McCaffrery、Napoli等证实维生素A在卵泡的发育和卵细胞的成熟过程中发挥作用，且参与哺乳动物繁殖和胚胎发育。在癌症患者体内RBPs参与AKT/EGFR、Wnt等信号通路，通过调控细胞的增殖分化影响癌症的发生发展，但目前RBP1基因与母猪卵巢颗粒细胞生长发育的联系仍未见报道。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供RBP1基因在母猪卵巢颗粒细胞中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：RBP1基因在母猪卵巢颗粒细胞中的应用，体外环境下，RBP1基因调控母猪卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡。

所述的RBP1基因调控母猪卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡为通过如下方式实现：增加RBP1基因促进母猪卵巢颗粒细胞的增殖、抑制细胞的凋亡；或减少RBP1基因抑制母猪卵巢颗粒细胞的增殖、促进细胞的凋亡。

所述的增加RBP1基因促进母猪卵巢颗粒细胞的增殖、抑制细胞的凋亡为通过升高H3K4me3程度(升高H3K4me3程度能显著升高RBP1的相对表达量)，和/或增加外源性RBP1基因的方式实现。

所述的升高H3K4me3程度为采用H3K4me3激动剂进行。

所述的H3K4me3激动剂为H3K4me3激动剂PBIT；优选为SIGMA公司的H3K4me3激动剂PBIT。

所述的H3K4me3激动剂PBIT的有效浓度为2～4μM；优选为2μM。