[发明专利]一种紫薇组织培养再生体系的构建方法

权利要求书

1.一种紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，所述紫薇组织培养再生体系的构建方法包括以下步骤：

收集种子；

选择优良单株；

扦插、嫁接；

组织培养：叶芽诱导、愈伤诱导后，移栽在紫薇培养基进行培养。

2.如权利要求1所述的紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，叶芽诱导包括：选取叶芽、丛生芽、生根、移栽。

3.如权利要求1所述的紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，愈伤诱导包括：选取叶和径、愈伤、丛生芽、生根、移栽。

4.如权利要求1所述的紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，组织培养或采用体胚诱导进行，具体包括：选取叶和径、体胚、丛生芽、生根、移栽。

5.如权利要求2所述紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，叶芽诱导具体包括：

第一步，选取紫薇的一年生扦插苗外植体消毒，取消毒后的外植体切割为1.5-3cm长的茎段，其中每个茎段带一个叶芽，将茎段接种于诱导培养基中进行芽的分化诱导，控制培养温度在25-28℃，首先在黑暗中培养25-30h，然后进行光照时间15-20h/天，培养20-35天，得紫薇嫩梢；

第二步，继代培养与增殖：将第一步中所得紫薇嫩梢切割后接入继代培养基中进行继代培养35-40天，培养温度26-28℃，光照时间16-18h/天，光照强度为1600-2000lx，得到多个腋芽的继代无菌苗；

第三步，根的诱导：将第二步所得经过继代的无菌紫薇试管苗切成带叶芽的小段，接入生根培养基中进行生根培养15-20天，培养温度26-28℃，光照时间16-18h/天，光照强度为1600-2000lx，至此获得含根无菌苗。

6.如权利要求5所述紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，第一步中，外植体消毒过程为：用清水冲洗干净，然后用洗衣粉漂洗一次，用消毒液摇床上振荡消毒30min，流水冲洗45min后，于无菌操作台上用乙醇消毒90s，立即倒入0.2％的升汞消毒5min，最后用无菌水洗涤；

诱导培养基为：1/2MS0.6mg/L+NAA0.1mg/L+GA25.1mg/L+琼脂5.5g/L，蔗糖20g/L，培养基pH为6.5。

7.如权利要求5所述紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，第二步，继代培养基为：1/2MS0.4mg/L+NAA0.03mg/L+琼脂5.5g/L，蔗糖20g/L，培养基pH为6.5。

8.如权利要求5所述紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，

第三步，生根培养基为：1/2MS0.1mg/L+IBA1.5mg/L+琼脂5.5g/L，蔗糖20g/L，培养基pH为6.5。

9.如权利要求1所述紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，移栽后的含根无菌苗移栽在紫薇培养基中，所述培养基制备方法如下：

(1)将收集的虾蟹壳洗净除去附着物，然后烘干研磨得到虾蟹壳粉，将收集的玉米芯烘干后粉碎得到玉米芯粉，备用；

(2)按照蛭石16份、虾蟹壳粉8份、草木灰9份、葡萄皮渣6份、熟田土25份、玉米芯粉5份、硅藻土4份、保水剂0.5份的重量份配比称取各原料；

(3)将(2)称取的熟田土、蛭石、葡萄皮渣、玉米芯粉倒入容器中混合，搅拌均匀后加水使混合物润湿，然后将容器密封，在35℃的温度下陈化8天；

(4)将(3)步骤陈化好的混合物与(2)步骤称取的草木灰、硅藻土、虾蟹壳粉、保水剂混合后即得到紫薇培养基。

10.如权利要求1所述紫薇组织培养再生体系的构建方法，其特征在于，收集种子后，进行种子培育，所述种子培育方法包括：

1)种子发酵：采集成熟的紫薇果实，向果实中加入果实重量190倍量的水，浸泡5小时，加入白砂糖，接入醋酸菌，26℃发酵35小时，得发酵种子；

2)种子干燥：向发酵种子中加入果实重量34％的紫薇树皮粉，于49℃保温浸泡8小时，降为室温，继续浸泡23小时，过滤，冷冻干燥至含水量为9％，除去果皮，室温贮藏，得干燥种子；

3)种子浸泡：播种前，将干燥种子置于质量浓度为0.13％的浸泡液中，于3℃静置浸泡19小时，得浸泡种子；

4)种子催芽：将浸泡种子置于催芽箱，5小时，调节温度为22℃、湿度为77％，进行紫外光照，13小时及以后，调节温度为25℃、湿度为78％，光照为650lx，得催芽种子。