[发明专利]一种适用于贝类软体动物卵的外源物质导入方法

权利要求书

1.一种适用于贝类软体动物卵的外源物质导入方法，其特征在于，包括下述步骤：

1)制备液体凝胶；

2)制备细胞载具：取洁净的盖玻片，先以具备与卵径相匹配直径的金属丝沿其宽度方向缠绕5圈，再将缠绕金属丝的盖玻片轻覆于步骤1)中的液体凝胶表面，使液体凝胶浸没盖玻片底面；待液体凝胶凝固后，将缠绕金属丝的盖玻片取下，得到具有多个凹槽的细胞载具，备用；

3)拉针：对排布针及注射针进行系统拉针；具体为将普通玻璃制排布针安装到拉针仪上，设置拉针仪的参数为：Heater650，Pull70，Vel65，TIME250，拉针的过程如下：将石英制注射针安装到拉针仪上，设置拉针仪的参数为：Heater650，FIL4，Pull200，Vel50，Del150，LINE1，PROG90；

4)细胞排布：先将步骤3)所得排布针的针尖切除4-5mm，再以切除针尖后的排布针将卵细胞均匀排布于细胞载具内，并以海水覆盖整个细胞载具；

5)注射针预处理：先向注射针内加入外源物质溶液；然后切除注射针针尖20μm，切除后，切口内径2-3μm，备用；

6)显微注射：将细胞载具置于倒置显微镜载物台上，调节注射针与注射针操作臂的夹角，直至注射针与细胞载具所在平面的夹角呈30°，然后以微量显微注射仪对卵细胞进行显微注射；对卵细胞进行注射时，设置注射时间为500ms，补偿压力pc为50，在10倍或20倍镜视野下进行自动化微量注射；所述石英制注射针的内径为0.7mm。

2.根据权利要求1所述的一种适用于贝类软体动物卵的外源物质导入方法，其特征在于，步骤1)中液体凝胶的制备过程如下：(11)将海水抽滤、灭菌，得到灭菌海水，备用；

(12)向步骤(11)得到的灭菌海水中加入灭菌海水体积10％的蒸馏水及灭菌海水质量1％的琼脂糖，得到混合体系；

(13)对步骤(12)所得混合体系进行加热，得到混合溶液；将混合溶液倒入培养皿中，摇匀，得到液体凝胶。

3.根据权利要求1所述的一种适用于贝类软体动物卵的外源物质导入方法，其特征在于，步骤4)中每个凹槽内卵细胞的个数为100-200个。