[发明专利]一种基于CMV RNA2的体外干扰黄瓜花叶病的制剂、其制备方法与应用

说明书

本发明提供黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus)RNA2片段，及所述RNA2片段在抑制黄瓜花叶病上的应用。本发明的含有CMV‑RNA2片段的制剂在抗黄瓜花叶病中具有显著的抑制作用，抑制效率高，部分处理组能够完全抑制病毒积累，且具有无农药残留的优势，安全性较高；由于采用CMVRNA2小片段混合GKP缓冲液和吐温展着剂直接涂抹或喷施于植株表面的预处理方式，尤其适于苗床期幼苗的病毒病防治。

技术领域

本发明涉及植物抗病与分子生物学技术领域。具体涉及一种基于基于CMV RNA2的体外干扰黄瓜花叶病的制剂，还涉及所述制剂的制备方法及其应用。

背景技术

黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）是雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)黄瓜花叶病毒属(Cucumovirus)的典型代表成员。该病毒的基因组由三条正义链RNA（RNAl、RNA2、RNA3）以及两条亚基因组（RNA4、RNA4A）组成，RNA4A是RNA2的亚基因组，RNA4是RNA3的亚基因组。三条正义链RNA共编码5种蛋白（1a位于RNA1链、2a和2b位于RNA2链、MP 和 CP位于RNA3链），CMV 2b 蛋白是基因沉默抑制子，缺失2b蛋白的CMV虽然能够浸染植物，但是寄主植物的症状明显减弱。CMV 寄主广泛，能够侵染单、双子叶植物达85科、1200多种，CMV浸染可引起植株矮化、叶片畸形和花叶等症状，使植株正常生长受到严重抑制，不仅降低了农作物产量还影响了农产品质量，是目前发生最广和危害最大的病害之一。

由于病毒大多具有绝对寄生性和系统侵染性，以及植物没有像动物那样完整的免疫代谢系统，使得一旦被侵染就终生处于被为害状态，这也使得植物病毒病较其它植物病害更难防治。尤其是一旦发生病毒病后就很难找到一种有效药剂控制其蔓延和危害。同时，农药的大量应用也不符合可持续生产的要求。近年来，由于耕作制度变迁，田间病毒复合侵染现象严重，加重了病毒病对植株的危害。在生产上应用抗多个病毒病的品种几乎没有，直接表现为抗病毒育种对病毒病防治的贡献率较低。由于年度间气候变化和单一农药的长期使用，病毒病仍频发，在局部地区造成严重损失。

RNA干扰（RNA interference，RNAi）又称基因沉默，是由外源基因导入植株体内或内源双链 RNA（double-strands RNA，dsRNA）诱发在DNA水平修饰或转录后水平降解同源RNA的特异性沉默现象。RNAi现象在生物体内普遍存在，被生物学家誉为“生物体在基因组水平上的免疫系统”。本发明则利用RNA干扰原理，通过筛选病毒的RNA片段，并进行外源预处理，创制了一种达到抑制病毒增殖的技术，形成了一种防治病毒的新思路。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术缺陷，针对当前黄瓜花叶病防治效果较差、防治费用较高的问题，提供了一种利用CMV RNA小片段对植株进行外源预处理，进而诱导、增强寄主对黄瓜花叶病的抗病作用，建立了一种作用高效、操作简便的防治黄瓜花叶病的新技术，同时也为其它病毒的防治提供新思路。

为了实现上述目的，本发明从黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）的三条RNA链出发，确定来源于RNA2链的小片段能够介导对CMV的抑制作用。

基于此，本发明提供黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus)RNA2片段，所述片段的序列如SEQ NO.1所示。

进一步地，本发明还提供上述黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus)RNA2片段在抑制黄瓜花叶病上的应用。

本发明还提供含有上述黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus)RNA2片段的制剂。