[发明专利]一种检测尿液中皮质醇的方法

说明书

本发明提出了一种检测尿液中皮质醇浓度的方法。更具体地说，本发明提出了以同位素内标为校准品，以尿液中肌酐含量来均一化不同个体的尿液浓度差异，结合UPLC‑MS/MS技术检测尿液中皮质醇浓度的方法。本发明提供的方法能够在检测尿液中皮质醇浓度的同时检测肌酐浓度，由此可以归一化皮质醇浓度，使得尿液中的皮质醇能够为评估人体压力水平提供技术基础，并为个性化干预调节人体压力状况提供有效信息和依据。

技术领域

本发明涉及分析化学和医学检测领域，具体地，本发明涉及一种基于高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的快速检测尿液中皮质醇浓度的方法。

背景技术

皮质醇是从肾上腺皮质中分泌的对糖类代谢具有最强作用的肾上腺皮质激素，是糖皮质激素的一种。皮质醇在操纵情绪和健康、免疫细胞和炎症、血管和血压间联系，以及维护缔结组织如骨骼、肌肉和皮肤等方面具有特别重要的功效。在压力状态下身体需要皮质醇来维持正常生理机能，否则身体将无法对压力作出有效反应。

正常情况下，身体能很好地控制皮质醇地分泌和调节血液中皮质醇的含量，但生活不规律或者压力过大的人会使皮质醇水平在本该下降的时候升高。如果长期压力过大，节奏过快，会促使人体内的皮质醇水平长期偏高。这时皮质醇的负面效应开始显现为新陈代谢的变动，例如血糖升高、食欲增加、体重上升以及极度疲劳等等。

针对上述情况，本领域中需要一种实时、精准、无创检测皮质醇的方法，使得能够评估人体压力状况并对其进行及时干预和调节，也能够检测与皮质醇相关的疾病如皮质醇增多症，具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明提出了一种检测尿液中皮质醇浓度的方法。更具体地说，本发明提出了一种尿液沉淀法结合UPLC-MS/MS技术快速精准检测尿液中皮质醇浓度的方法。

本发明检测尿液中皮质醇浓度的方法以同位素内标为校准品，用尿液中肌酐含量来均一化不同个体的尿液浓度的差异，使用UPLC-MS/MS来检测尿液中的皮质醇浓度。

在一方面，本发明提供了一种检测尿液中皮质醇浓度的方法，所述方法包括以下步骤：

步骤1，配制样品：

1a.配制标品溶液，其包括多个浓度的皮质醇标品溶液和多个浓度的肌酐标品溶液；

1b.配制同位素内标溶液，其包括皮质醇同位素内标溶液和肌酐同位素内标溶液；

步骤2，样品预处理，得到含同位素内标的标品溶液和含同位素内标的尿样；其中，所述样品预处理包括对尿液进行去除蛋白的步骤和向尿液和标品溶液中加入的相应的同位素内标溶液的步骤；

步骤3，构建标准曲线，其中，将步骤2的含同位素内标的标品溶液进行UPLC-MS/MS测定；

步骤4，获得经肌酐浓度归一化的皮质醇浓度，其中将步骤2的所述含同位素内标的尿样进行UPLC-MS/MS分析，结合步骤3得到的标准曲线获得皮质醇浓度和肌酐浓度；获得经肌酐浓度归一化的皮质醇浓度。

在一个实施方案中，所述尿液是新鲜的尿液。

在又一个实施方案中，所述尿液是经长期低温冻存的。优选地，在所述低温冻存的尿液中含有叠氮化钠，以防止尿液在低温运输或保存中滋生细菌或发生氧化从而改变皮质醇的浓度。优选地，加入叠氮化钠的量为尿液体积的0.05％至5％，优选为0.1％至2.5％，更优选为1％。

在又一个实施方案中，所述尿液来自干尿液样品。可选地，所述干尿液样品经溶剂溶解后。

在一个实施方案中，步骤1a中配制的多个浓度的皮质醇标品溶液的数目可以为至少3个，优选为4个至10个，更优选为4个、5个或6个；步骤1a中配制的多个浓度的肌酐标品溶液的数目可以为至少3个，优选为4个至10个，更优选为4个、5个或6个；皮质醇标品溶液和肌酐标品溶液的浓度可以是相同或不同的。