[发明专利]一种检测血液中利奈唑胺含量的在线固相萃取液相色谱法

说明书

本发明属于医学检验领域，涉及体内抗菌药物含量测定方法，具体涉及一种检测血液中利奈唑胺含量的在线固相萃取液相色谱法。种检测血液中利奈唑胺含量的在线固相萃取液相色谱法，对待测血样进行预处理后，通过高效液相色谱仪采用标准曲线法测定利奈唑胺含量本发明所述的检测血液中利奈唑胺药物浓度的在线固相萃取液相分析方法，血浆经过蛋白沉淀后直接进样，减少了人员操作，提高了定量结果的准确性。

技术领域

本发明属于医学检验领域，涉及体内抗菌药物含量测定方法，具体涉 及一种检测血液中利奈唑胺含量的在线固相萃取液相色谱法。

背景技术

利奈唑胺为恶唑烷酮类的合成抗生素，可用于治疗由需氧的革兰阳性菌引 起的感染。利奈唑胺为细菌蛋白质合成抑制剂，作用于细菌50S核糖体亚 单位，抑制mRNA与核糖体连接，阻止70S起始复合物的形成，从而抑制了 细菌蛋白质的合成。利奈唑胺(Linezolid,LNZA)分子式为C₁₆H₂0FN₃O₄， 利奈唑胺的有效血药浓度为1.0-4.0mg/L，当血药浓度＞4.0mg/L时，毒副 作用增强。不良反应常见恶心、贫血、血小板减少。由于LNZA治疗窗较窄， 体内代谢过程存在较大的个体差异，所以对其血药浓度的监测是调整剂量， 减少不良反应的重要参考，在临床用药中具有重大意义。

目前常用的利奈唑胺血药浓度的测定方法众多，但目前仍存在前处理复杂、 成本高，或对实验人员和环境要求高，分析时间较长等问题。

综上所述，开发和验证一种快速、灵敏、选择性的液相色谱法测定人血浆 中的利奈唑胺含量具有重要的分析意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的现状，提供一种检测血液中利奈唑胺 含量的在线固相萃取液相色谱法。

本发明为解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种检测血液中利奈唑胺含量的在线固相萃取液相色谱法，其特征在 于，包括如下步骤：

(1)血浆样品的预处理：取待测样品，加入蛋白沉淀剂进行沉淀；

(2)标准曲线的绘制:取20uL标准工作液，加入空白血浆至1ml，混 匀至成6个浓度的标准溶液，将获得的标准溶液分别加入蛋白沉淀剂进行 沉淀，9000-15000rpm下离心10-15min，分别取上清液用高效液相色谱仪 和DAD检测器对上述上清液进行检测，得出上述标准溶液中的利奈唑胺谱 图，以利奈唑胺的峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中 含有利奈唑胺的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将数据进行线性回归，拟 合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a、b及相关系数R²； 该标准曲线至少用三份不同批次的标准工作液绘制三次；标准工作液是含 有利奈唑胺的溶液；

(3)检测血液的离心:取待检测血液至少2ml，在离心速度为 3500-4500rpm下离心10-15min，得到上清液，将上述上清液置于-20℃冷冻 下保存备用；

(4)待测样品的检测：

S1:用水浴加热(37℃)，将步骤(3)中的上清液复融；

S2:用移液枪移取步骤S1中复融后的上清液800-1000uL按步骤(1) 进行预处理后，离心得上清液即为待测样品；

S3:移取步骤(c)待测样品600-800uL，使用高效液相色谱仪和DAD检 测器对上述待测样品进行检测，得出上述待测样品的利奈唑胺色谱图，将 上述色谱图中的利奈唑胺峰面积y代入上述步骤(2)的标准曲线方程y＝ a*x+b中，通过计算得到待检测样品中利奈唑胺的浓度。

2.根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于：所述的蛋白沉淀剂 为乙腈。