[发明专利]一种可稳定表达人RANK基因的工程细胞株及其应用

说明书

本发明提供了一种可稳定表达人RANK基因的工程细胞株及其应用，具体地，本发明提供一种工程细胞株，所述细胞株的基因组中整合有第一表达盒和第二表达盒，所述第一表达盒表达外源的RANK基因，所述第二表达盒表达外源的受NF‑κB基因响应的报告基因。本发明的细胞株可用于体外测定或评估抗RANKL单抗对RANK‑RANKL之间相互作用的抑制或者阻断效果，本发明的方法具有专属性好、准确性高、精密度良好、检测范围宽、稳定耐用等特点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种可稳定表达人RANK基因的工程细胞株及其及应用，更具体地，涉及可稳定表达人RANK基因的工程细胞株的构建方法，以及利用这一细胞株开发相应的生物分析方法，在生物制药中的应用。

背景技术

生物学活性是生物药的关键质量属性，直接影响到生物药的质量，在整个工艺过程中需要严格把控。不同批次的原液、成品生物学活性存在一定差异，基于荧光素酶报告基因的MOA(Mode of Action)方法是一种简单、灵敏、操作简便的生活学活性测定方法，最能真实反映药物体内作用机理，同时能够准确的反映出生物药的活性差异。

目前针对RANKL靶向治疗药物的生物学活性检测方法中，缺乏对检测体系专属性、准确性、精密度、线性、稳定性等方面的方法验证和评价，难以确保检测结果的准确性与可靠性。

因此，本领域迫切需要开发一种可稳定表达人RANK基因的工程细胞株，可用于开发抗RANKL单抗药物的体外生物学活性细胞法，用于体外测定或评估抗RANKL单抗对RANK-RANKL之间相互作用的抑制或者阻断效果，方法稳定，重复性好。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可稳定表达人RANK基因的工程细胞株，可用于开发抗RANKL单抗药物的体外生物学活性细胞法，用于体外测定或评估抗RANKL单抗对RANK-RANKL之间相互作用的抑制或者阻断效果，方法稳定，重复性好。

本发明的第一方面，提供了一种工程细胞株，所述细胞株为哺乳动物的体细胞，并且所述细胞株的基因组中整合有第一表达盒和第二表达盒，其中，所述第一表达盒表达外源的RANK基因，所述第二表达盒表达外源的受NF-κB基因响应的报告基因。

在另一优选例中，所述的外源的RANK基因为人RANK基因。

在另一优选例中，所述的RANK基因包括cDNA基因。

在另一优选例中，所述的RANK基因包括野生型和突变型基因。

在另一优选例中，所述报告基因的转录表达依赖NF-κB响应元件(NF-κB RE)的激活。

在另一优选例中，所述的第二表达盒具有以下结构：

(B1)n-B2-B3-B4 (I)

式中，

B1为NF-κB响应元件(NF-κB RE)；

n为3-10的正整数；

B2为极小启动子元件(Minimal promoter element)；

B3为报告基因编码序列；和

B4为无或polyA序列；

各“-”为键或连接序列。

在另一优选例中，所述的n为4、5、6、7或8。

在另一优选例中，所述的极小启动子元件为弱启动子。

在另一优选例中，所述的极小启动子的长度为20-50nt，较佳地25-40nt。

在另一优选例中，所述的极小启动子选自下组：源自adh启动子的极小启动子、源自HSVtk启动子的极小启动子。