[发明专利]一种间充质干细胞保存液及其保存方法和应用

说明书

本发明提供了一种间充质干细胞保存液及其保存方法和应用，涉及干细胞保存液技术领域。本发明提供的间充质干细胞保存液包括以下体积百分比的组分：玻璃酸钠0.1％～0.5％、白蛋白0.2％～0.4％和余量生理盐水。利用本发明提供的保存液24h内干细胞存活率达到80％以上。

技术领域

本发明涉及干细胞保存液技术领域，具体涉及一种间充质干细胞保存液及其保存方法和应用。

背景技术

间充质干细胞可从各种组织中分离，如骨髓、脂肪组织、皮肤、骨骼肌和脐带血等。其中，源自脂肪组织的干细胞称为脂肪干细胞(ASC)(Gimble et al.,2011)。通过最少的手术程序可以很容易地获得脂肪来源的干细胞，并且细胞产量高于典型的骨髓来源的间充质干细胞(MSC)(B.cousin et al.,BBRC 301:1016,2003；A.Miranville et al.,Circulation,110:349,2004；S.Gronthose et al.,J.Cell Physiol.189:54,2001；M.J.Seo et al.,BBRC,328:258,2005)。它被认为是最有用的间充质干细胞，因为它含有丰富的生长因子和细胞因子(Sgodda et al.,2007,P.A.Zuk et al.,Tissue Eng.7:211,2001；A.M.Rodriguez et al.,BBRC,315:255,2004)。由于这些优点，脂肪来源的干细胞已经广泛地用作医药目的的细胞治疗以及美容化妆品，其中包括不可治愈的疾病的治疗。当用作细胞治疗剂时，将培养的干细胞直接施用于患者时没有问题，但是当由于位置问题导致的运输需要长期保存细胞时保持高存活率是非常重要的。

通常，使用细胞冷冻方法，其中细胞以约1℃/分钟的速率缓慢冷却，储存在约-200℃，并在储存后快速解冻，作为储存从活体分离的细胞的方法(Sinha N et al,2019,ErikJW et al,2009)。用于细胞长期储存的细胞冷冻存在的问题是，解冻时细胞的存活率非常低并且不能完全发挥干细胞的功能(Ali EO et al,2019/Wang WZ et al,2013)。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种间充质干细胞保存液及其保存方法和应用。利用本发明提供的保存液24h内干细胞存活率达到80％以上。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种间充质干细胞保存液，包括以下体积百分比的组分：玻璃酸钠0.1％～0.5％、白蛋白0.2％～0.4％和余量生理盐水。

优选地，包括以下体积百分比的组分：玻璃酸钠0.3％、白蛋白0.3％和余量生理盐水。

本发明还提供了上述技术方案所述保存液保存间充质干细胞的保存方法，包括：将所述保存液与间充质干细胞混合后，经冷藏和振荡后进行无氧保存。

优选地，所述保存液的体积与间充质干细胞的个数比为(2～4)mL:(3×10⁶～7×10⁶)个。

优选地，所述保存液的体积与间充质干细胞的个数比为3mL:5×10⁶个。

优选地，所述冷藏的温度为3～8℃。

优选地，所述冷藏的温度为4℃。

优选地，所述振荡的频率为40～50次/分钟。

优选地，所述振荡的频率为44次/分钟。

本发明还提供了上述技术方案所述保存液在提高间充质干细胞存活率中的应用。