[发明专利]基于脱落细胞染色的特殊染色液及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种基于脱落细胞染色的特殊染色液及其制备方法和应用。按重量百分比计，该特殊染色液包括：叶酸2‑5％，还原剂1‑12％，pH调节剂2‑8％，亚甲基蓝2‑5％，促渗剂3‑25％，水5‑85％。本发明在特殊染色液中添加了促渗剂，促渗剂不仅能够减缓抗坏血酸等还原剂的水解，确保亚甲基蓝处于还原态，提高特殊染色液的稳定性；还能促使亚甲基蓝快速通过皮肤屏障和细胞膜进行染色，提高染色效率和染色准确率，避免假阳性结果的出现。

技术领域

本发明属于活细胞染色剂技术领域，具体涉及一种基于脱落细胞染色的特殊染色液及其制备方法和应用。

背景技术

特殊染色是一种为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，而选用相应的染色液以显示这些成分的染色方法。

临床研究表明，叶酸受体的数量会在癌细胞表面高度表达，而在正常细胞中则较少或不表达；同时由于癌细胞处于强烈的氧化应激环境中，因此癌细胞中还存在大量的活性氧，而正常细胞中则没有这种现象。在该临床研究的基础上出现了一种新的染色诊断方法，即叶酸受体介导的特殊染色方法，亚甲基蓝与叶酸形成的复合物对癌细胞具有高效靶向性，且在酸性条件下该复合物更易于癌细胞表面的叶酸受体结合，从而可进入癌细胞；而在肿瘤细胞的氧化应激环境下，还原态的无色亚甲基蓝会转化而蓝色或蓝黑色的氧化态，由此实现对癌细胞的诊断。

基于该特殊颜色方法的原理，目前市面上出现了很多相关的特殊染色液。如公开号为CN 103483872 A的中国发明专利申请中公开了一种用于肿瘤组织细胞的染色剂组合物，按重量百分比计，该染色剂组合物包括：显色剂0.01-5％，叶酸≤6.5％，隐色剂0.1-10％，pH调节剂≤10％，水3-95％；其中，显色剂为亚甲基蓝、二氯酚靛酚和二氯酚靛酚钠中的至少一种，隐色剂为抗坏血酸、锌粉、辛酸亚锡中的至少一种，pH调节剂为甲酸、乙酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、丁二酸、酒石酸或硼酸。

现有技术中常采用抗坏血酸作为隐色剂，然而抗坏血酸的稳定性较差，这就会导致染色液的诊断结果出现误差；为了尽可能地避免该误差，目前的这类特殊染色液在使用时，都是先采用载体(如棉签)先蘸取染色液，将染色液直接涂抹于人体组织，而后观察载体上染色液的颜色变化，根据该颜色变化对所测试的组织细胞区域是否产生病变进行判断。这种使用方法的不足之处在于，①染色液接触空气的时间较长，而还原性的亚甲基蓝易于被空气氧化而出现假阳性诊断结果；②染色液直接接触人体，容易对人体产生毒性，而造成二次伤害。

发明内容

本申请的发明目的是提供一种基于脱落细胞染色的特殊染色液及其制备方法和应用。

为实现上述发明目的，本申请的技术方案如下：

一种基于脱落细胞染色的特殊染色液，按重量百分比计，包括：叶酸2-5％，还原剂1-12％，pH调节剂2-8％，亚甲基蓝2-5％，促渗剂3-25％，水5-85％。

本发明在特殊染色液中添加了促渗剂，促渗剂不仅能够减缓抗坏血酸等还原剂的水解，确保亚甲基蓝处于还原态，提高特殊染色液的稳定性；还能促使亚甲基蓝快速通过皮肤屏障和细胞膜进行染色，提高染色效率和染色准确率，避免假阳性结果的出现。

本发明中，所述的还原剂可以是抗坏血酸或锌粉，所述的pH调节剂可以是乙酸或乳酸。

在上述的基于脱落细胞染色的特殊染色液中，所述的促渗剂为丙二醇、丙三醇和丁二醇中的至少一种。抗坏血酸结构中的环组成是烯二醇基，碳碳双键中一个是σ键，另一个是π键；其中，π键容易引起共轭，其α碳电子在p轨道形成π(2，2)，同时与相连接的两个氧原子发生p-π共轭效应π(4,6)，电负性增强，容易对H原子吸引力下降，发生水解；同时，在抗坏血酸的水溶液中，水分子间存在次级键-氢键，而抗坏血酸分子结构中的氢原子和邻位羰基氧原子则会生成与水略微不同的次级键，容易使内酯环水解。丙二醇、丙三醇和丁二醇等极性较小的溶剂能破坏该次级键，达到减缓抗坏血酸水解的目的。