[发明专利]多甲氧基黄酮提取物在制备抵抗氧化应激产品中的应用

说明书

本发明提供多甲氧基黄酮提取物在制备抵抗氧化应激产品中的应用。所述多甲氧基黄酮提取物为瓯柑果皮固相萃取后梯度洗脱粉末。瓯柑皮的多甲氧基黄酮提取物能够在人肝L02细胞、人胃GES细胞、人脐静脉上皮HUVEC细胞、人成纤维WI‑38细胞内显著增加抵御过氧化氢氧化应激损伤的能力，并使得细胞去除多甲氧基黄酮提取物后保持抵御氧化应激损伤能力。可作为功能食品、保健品或防治药物用于氧化应激损伤相关疾病的防治。

技术领域

本发明属食品药品领域，涉及天然来源的瓯柑多甲氧基黄酮组分在制备氧化应激功能保护食品、保健品或防治药物中的应用，尤其涉及瓯柑多甲氧基黄酮提取物在人肝L02细胞、人胃GES细胞、人脐静脉上皮HUVEC细胞、人成纤维WI-38细胞抵抗过氧化氢氧化应激时的应用。

背景技术

氧化和还原是自然界中最常见的化学反应，表现为共价电子对的电子得失或偏移。当生物体内的氧化物积累速率超过生物体还原反应和对氧化物清除速率时，将发生氧化应激损伤。已有研究表明，氧化应激损伤与多种疾病的发生发展相关，包括癌症、糖尿病、肥胖、神经系统疾病和动脉粥样硬化等。

天然产物可以帮助机体免受氧化应激损伤的危害，其中大部分为自身具有还原效应的，表现为与活性氧发生反应的“结合型”抗氧化天然活性物质，而可以增强细胞自身抗氧化能力，甚至使得细胞保持这种抵御氧化应激损伤的能力一段时间的天然活性产物，未见报道。

瓯柑(Citrus reticulata cv.Suavissima)是芸香科柑橘属的一个栽培变种，也是浙江省温州、丽水地区的传统特产，已经有两千多年的栽培历史。瓯柑在民间具有抗肿瘤、祛热生津、化痰止咳、清凉解毒等特殊食药功能，这些作用可能与瓯柑中富含多甲氧基黄酮类化合物有关。多甲氧基黄酮(Polymethoxylated Flavonoids,PMFs)是指具有4个及4个以上甲氧基取代基的黄酮类化合物，主要来源于芸香科柑橘属植物，尤其在柑橘果实的果皮中含量丰富。柑橘果实中的多甲氧基黄酮类化合物在抗肿瘤、抗炎、抗诱变和保护心血管等方面具有很好的活性，关于多甲氧基黄酮的生物活性机制研究也逐渐深入。自1934年首次分离出多甲氧基黄酮类化合物单体以来，人们对其活性进行了大量的研究。近年来研究发现，多甲氧基黄酮类化合物具有抑制癌细胞增殖、抵抗肿瘤侵袭和转移作用、促进癌细胞凋亡和自噬等生物活性。但是关于瓯柑多甲氧基黄酮组分的提高和保持细胞抵抗氧化应激损伤能力的研究，尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供多甲氧基黄酮提取物在制备抵抗氧化应激产品中的应用。所述多甲氧基黄酮提取物为瓯柑果皮的固相萃取(SPE)梯度洗脱粉末。

所述多甲氧基黄酮提取物通过以下方法制备获得：

(1)瓯柑成熟果实，经过挑选果皮无机械损伤和病虫害的果实，进行果皮和果肉分离，液氮速冻后经过低温真空干燥，磨样后得到冷冻干燥粉末。称取冷冻干燥的瓯柑果实果皮粉末用95％乙醇(固液比比1：20)超声提取三次(25℃)，每次45min，真空抽滤后，合并上清液，在旋转蒸发仪上蒸干至无乙醇相，溶于去离子水中，得到瓯柑果皮提取物水溶液。

(2)取瓯柑果皮提取物水溶液约5mL上样C18固相萃取柱(12cc/2g，Waters)，上样后固相萃取柱先用去离子水洗脱25倍柱床体积(BV)去掉极性较高的杂质，然后用35％甲醇12BV进行洗脱去掉杂质，然后用100％甲醇3BV洗脱，洗脱流速为1mL/min，收集洗脱液约12mL，洗脱液在旋转蒸发仪上36℃蒸干得到207.2mg，即为瓯柑富含多甲氧基黄酮组分的粉末。

所述产品包括功能食品、保健品或防治药物。