[发明专利]花烟草NaD1基因启动子及其用途

说明书

本发明公开了一种花烟草NaD1基因启动子及应用。所述启动子具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明还提供了含有所述启动子的载体和宿主细胞，本发明还涉及含有所述启动子的核酸构建体、载体、重组细胞、转基因植物、外植体和愈伤组织，本发明还公开了所述启动子的用途。其优点在于该启动子中含有光反应元件，光胁迫处理可使NaD1基因在花中的表达有显著变化，研究该启动子调控模式在更高效地利用NaD1蛋白中有重要用途。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及花烟草NaD1基因启动子及其用途。

背景技术

启动子是指RNA聚合酶特异性识别和结合，指导基因开始转录的特定DNA序列。真核生物启动子分为核心启动子区和上游序列区两个区域，核心启动区含有转录起始位点和TATA-box等顺式作用元件；上游序列区含有不同的调控表达元件，对基因转录的效率、特异性和活性起关键作用，确保基因转录的有效性和精确性。根据转录模式的不同，启动子可分为组成型、组织特异型和诱导型。了解启动子的元件构成及其功能，对于研究基因的时空表达和转录调控至关重要，此外，因对外源基因表达水平的调控作用，启动子成为基因工程表达载体的重要元件之一。

Nicotiala alata defensin 1(NaD1)蛋白是一种来自观赏性花烟草(Nicotianaalata)的植物防御素，它对尖孢镰刀杆菌，灰霉菌，念珠菌等多种致病性真菌具有抗菌活性，并对多种哺乳动物肿瘤细胞具有杀伤作用，因此NaD1具有重要的研究价值。对于NaD1的研究主要涉及蛋白功能和作用机制，而其基因调控元件的研究未有报道。其中启动子对基因表达起到重要调控作用，了解其调控模式能有助于更高效地利用NaD1蛋白。

本发明对花烟草NaD1基因的上游调控序列进行了克隆，以期得到其启动子基本元件的完整序列，对其进行生物信息学分析。通过构建连接缺失启动子片段启动GUS基因表达的植物表达载体，遗传转化花烟草，从而验证启动子的活性。对花烟草NaD1基因的表达模式进行了分析，以期为研究NaD1基因的表达调控模式奠定基础。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种NaD1基因的光反应原件启动子。

花烟草NaD1基因启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步的，本发明还涉及一种核酸构建体，其包含本发明的启动子,与启动子可操作连接的基因序列。

进一步的，本发明还涉及一种重组载体，所述载体为本发明的启动子与pCAMBIA1391z Vector质粒经重组所得。

进一步的，本发明还涉及一种重组细胞，所述细胞含有权利要求1的启动子或权利要求3的核酸构建体或权利要求4的重组载体。

优选的，所述重组细胞为重组大肠杆菌细胞或重组根瘤农杆菌细胞。

本发明启动子制备方法：

以花烟草DNA为模板，使用3条特异性引物进行扩增，所述扩增引物按照GenomeWalking Kit说明书进行设计。

所述3条特异性引物分别含有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的序列所述引物在5’端还分别连接有限制性酶切位点和保护碱基。

进一步的，本发明还涉及一种转基因植物，所述转基因植物转化有本发明的启动子或核酸构建体或重组载体或感染本发明的重组细胞。

进一步的，本发明还涉及一种植物愈伤组织或外植体，所述愈伤组织或外植体转化有本发明的启动子或核酸构建体或重组载体或感染有本发明的重组细胞。

进一步的，本发明还涉及所述启动子或所述核酸构建体或所述重组载体或所述重组细胞在高效利用NaD1蛋白中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：