[发明专利]一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及胸苷激酶检测技术领域，具体是公开了一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，所述试剂盒采用双抗体夹心法人血清中TK1的含量，所述试剂盒包括公共液体、包被载体和工作液；所述公共液体包括化学发光底物、终止液和浓缩洗涤液，所述载体采用微孔板，所述工作液包括酶结合物、结合抗体、质检品和校准品。本发明克服了现有技术的不足，采用化学发光法进行检测，将检测周期控制在50min，操作简单方便，灵敏度大大提高，试验盒的实验结果稳定，重复性高。

技术领域

本发明涉及胸苷激酶检测技术领域，具体属于一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

胸苷激酶(TK1)是一种激酶，参与DNA的合成。胸苷激酶(TK1)被认为是一种较有参考价值的新肿瘤标记物,且其升高或降低与肿瘤的发生、发展、转移有密切关系。TK1酶活性与其对应蛋白量都在S期早期迅速升高和积累，并在进行有丝分裂细胞中达到最高。

现有的检测方法，检出率低，特异性不好，容易存在假阳性，假阴性的问题，对患者的病情的评判受到很大程度的影响。因此，必须通过适当的检测分析方法改善传统检测方法中存在的不足，以达到准确检测的目的。

发明内容

本发明的目的是提供了一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，解决现有检测方法检测时间长，灵敏度不高，重复性差的问题，对杂质的控制不严格，不能保证检测结果准确性的问题。

为解决上述问题，本发明所采取的技术方案如下：

一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，所述试剂盒采用双抗体夹心法人血清中TK1的含量，所述试剂盒包括公共液体、包被载体和工作液；所述公共液体包括化学发光底物、终止液和浓缩洗涤液，所述载体采用微孔板，所述工作液包括酶结合物、结合抗体、质检品和校准品。

进一步，所述酶结合物采用辣根过氧化物酶作为标记酶，所述化学发光底物采用DAB显色液，所述DAB显色液包括显色液A和显色液B。

一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备包被载体；抗TK1抗体用包被缓冲液稀释，取待包被微孔板，将经过稀释的抗TK1抗体负载于微孔板上，包被结束后，吸去包被缓冲液，再加入封闭液，置于37℃封闭3小时或在室温下封闭过夜；弃去封闭液，干燥包被载体后加入干燥剂密封包装，得到抗TK1抗体包被载体。

(2)制备公共液体：

A、制备终止液：终止液为pH7.2、6mmol/L的苏木精染色液；

B、制备DAB显色液；显色液A为pH7.2、10mmol/L的Tris-HCl溶液，显色液B为pH6.0、10mmol/L的过氧化氢溶液；

C、制备浓缩洗涤液；浓缩洗涤液为pH7.2-7.4、20mmol/L PBS缓冲液；

(3)制备标准品和质控品；用稀释液与人体血清按体积比3∶1比例混合配制成基础缓冲液，用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100、 80、60、40、20、0ng/mL标准品；用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100ng/mL高值质控品和50ng/mL低值质控品。

(4)组装试剂盒；将标准品和质控品、包被载体、公共液体经过半成品分装经过半成品质检后组装成胸苷激酶化学发光法检测试剂盒。

进一步，步骤1中包被缓冲液为pH7.2、10mmol/L的磷酸盐溶液，所述封闭液为pH7.4、20mmol/L的PBST溶液，内含1％BSA、0.1％Proclin300 以及3％蔗糖。

进一步，所述步骤2中显色剂A和显色剂B按照1:1的比例混合使用，现用现配。

进一步，所述步骤3中稀释液为pH7.4、20mmol/L PBS溶液。