[发明专利]一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法

说明书

本发明公开了一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，具体包括如下步骤：步骤1，制备壳聚糖溶液；步骤2，制作空白试纸条：步骤3，根据步骤2制作的空白试纸条制备壳聚糖改性试纸条；步骤4，制作壳聚糖改性侧流层析试纸；步骤5，对步骤4制作的试纸进行检测。本发明解决了现有侧流试纸灵敏度提升方法存在的操作复杂、成本高、耗时长及均一性差的问题。

技术领域

本发明属于试纸灵敏度测试技术领域，涉及一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法。

背景技术

在资源受限环境中，侧流层析试纸已被广泛的应用于疾病诊断、食品安全检测和环境检测。相对于传统的成本昂贵、耗时、需要专业技术人员在实验操作才能完成的检测技术。例如：酶联免疫吸附实验、聚合酶链式反应；侧流层析试纸具有成本低廉、操作简单、快速且便携的优点。目前，侧流层析试纸已被用于检测不同的目标物，如：核酸、蛋白、病毒、细菌、重金属等标志物。但是，灵敏度低的缺点限制了侧流层析试纸的广泛应用。

目前，研究者已使用不同的方法增强侧流层析试纸检测灵敏度。例如：基于酶的信号增强技术、基于探针的信号增强技术、减慢流速增强信号的技术和浓缩样品增强信号技术等。但是，这些技术需要昂贵的化学试剂或者复杂的编织过程等缺陷。许多研究者试图通过改变材料特性的方法提高纸基检测装置的灵敏度，但目前已有的方法中存在背景噪音高、材料合成时间长、操作复杂等缺陷，不能将其进行批量化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，该方法解决了现有侧流试纸灵敏度提升方法存在的操作复杂、成本高、耗时长及均一性差的问题。

本发明所采用的技术方案是，一种壳聚糖改性增强试纸检测灵敏度的方法，具体包括如下步骤：

步骤1，制备壳聚糖溶液；

步骤2，制作空白试纸条：

步骤3，根据步骤2制作的空白试纸条制备壳聚糖改性试纸条；

步骤4，制作壳聚糖改性侧流层析试纸；

步骤5，对步骤4制作的试纸进行检测。

本发明的特点还在于，

步骤1的具体过程为：称取15～25mg壳聚糖溶解在100ml 1％冰醋酸溶液中，稀释成0.005-25mg/ml的壳聚糖溶液。

步骤2的具体过程为：将硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫、吸水纸分别按顺序依次两两相互重叠粘贴在背胶板上，制成空白试纸，然后将空白试纸裁剪成3-7mm宽的试纸条。

步骤3的具体过程为：将步骤1配制好的壳聚糖溶液取0.5-2μL直接滴加在步骤2制作的空白试纸条硝酸纤维素膜表面质控线和检测线上，放置于25℃-37℃烘箱烘干30-60min。

步骤4的具体过程为：将修饰有检测探针的纳米金溶液取8-15μL滴加于结合垫上，分别将浓度为2.5nM-100nM的质控线探针溶液取0.5-2μL滴加于硝酸纤维素膜表面壳聚糖改性后的质控线位置处、将浓度为2.5nM-100nM的检测探针取0.5-2μL滴加于硝酸纤维素膜表面壳聚糖改性后的检测线位置处，制成壳聚糖改性的侧流层析试纸，然后将侧流层析试纸放置于25℃-37℃烘箱烘干60-120min。

步骤5的具体过程为：取步骤4干燥后的侧流层析试纸，将60-120μL的待测样本用移液器滴加在侧流层析试纸的样品垫上，至吸水纸完全浸湿后，观察对照线和检测线的显色情况，若对照线和检测线均显色，表明检测结果为阳性；若对照线显色，检测线未显色，表明检测结果为阴性；若对照线和检测线均不显色，表明试纸失效。