[发明专利]一种提高桔青霉产核酸酶P1酶活的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体公开一种提高桔青霉产核酸酶P1酶活的方法。本发明通过在使用包含植酸类化合物、表面活性剂和核酸类物质的发酵培养基，对桔青霉进行半连续发酵，制备获得含有核酸酶P1的发酵液。该本发明方法单批发酵时间由56h缩短至20h，酶活由2500U/mL提高至7100‑7500U/mL。本发明所用的产酶促进剂添加量少，成本低，操作简单，效果明显。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体涉及一种提高桔青霉产核酸酶P1酶活的方法。

背景技术

5'-核苷酸已广泛应用于食品、生化工业以及制药工业。在食品行业中，己经由最初的食品助鲜剂，扩展为具有提高生物体免疫功能的功能性食品添加剂，可以添加在面包、饼干等食品中，尤其在婴幼儿食品中的使用效果非常明显，能够有效增强婴幼儿抵抗细菌性痢疾的能力，减少腹泻的发生；在医药领域，5'-核苷酸不但能够作为药物使用，而且还是许多抗病毒抗肿瘤药物的生产原料；此外，核苷酸制剂还可以作为动植物生长调节剂，有着明显的增产、增重功效。

核苷酸生产主要采取三种方法：化学合成法、微生物发酵法及酶解法。酶解法由于降解RNA可以一次得到四种核苷酸的混合物，且酶反应收率较高，国内外工业化生产核苷酸均采用此法。在酶解法制备核苷酸中所需的酶是核酸酶Pl，它是一种能够水解RNA获得四种5'-核苷酸的磷酸二酯酶，其酶解产物杂质少后续分离工艺简单，国外一般采用该方法进行核苷酸的生产。

桔青霉属于不对称青霉组，绒状青霉亚组，桔青霉系，是核酸酶P1的重要生产菌种。国内外生产核酸酶P1主要通过桔青霉液体深层发酵，现有方法方法耗时较长酶活较低。如何高效的生产核酸酶P1，降低生产成本，已成为核苷酸生产的首要任务。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术存在的不足，提供一种提高桔青霉产核酸酶P1酶活的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种提高桔青霉产核酸酶P1酶活的方法，其使用包含植酸类化合物、表面活性剂和核酸类物质的发酵培养基，利用桔青霉进行半连续发酵，制备获得含有核酸酶P1的发酵液。

其中，所述的桔青霉为CGMCC No.2014，该菌株记载在中国专利CN101067116A中。

其中，所述的植酸类化合物为植酸钙镁、植酸钾和植酸锌中的任意一种或多种，优选植酸钙镁和植酸锌中的任意一种或两种组合，发酵培养基中植酸类化合物总浓度为0.001～1g/L，优选0.1～0.8g/L，更优选0.1～0.3g/L。

其中，所述的表面活性剂为吐温80、吐温60和司盘80的任意一种或多种，优选吐温80和司盘80中的任意一种或两种组合，发酵培养基中表面活性剂总浓度为0.001～5g/L，优选0.1～3g/L，更优选0.5～2g/L。

其中，所述的核酸类物质为RNA、DNA和核苷酸的任意一种或多种，优选RNA和核苷酸中的任意一种或两者组合，更优选RNA，发酵培养基中核酸类物质总浓度为0.001～5g/L，优选0.1～3g/L，更优选0.5～2g/L。

其中，所述的发酵培养基组分如下：葡萄糖0.5～50g/L，蛋白胨0.05～5g/L，磷酸二氢钾0.01～5g/L，磷酸氢二钾0.01～5g/L，硫酸镁0.01～5g/L，氯化钙0.01～5g/L，植酸类化合物0.001～1g/L，表面活性剂0.001～5g/L，核酸类物质0.001～5g/L，溶剂为水，pH5～8；

其中，所述的发酵培养基组分优选如下：葡萄糖20g/L，蛋白胨2g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，硫酸镁0.2g/L，氯化钙0.2g/L，植酸钙镁0.2g/L，植酸锌0.1g/L，Tween-80 0.5g/L，司盘-80 0.5g/L，RNA 0.5g/L，pH6，溶剂为水。