[发明专利]一种高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒

说明书

本发明提供一种高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸(α‑十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3‑二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸)的分析试剂盒，具体内容包括替代基质的预处理，干血斑样本的处理等。本方法灵敏度较高，用时较短，提高了检测效率。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体地说，本发明涉及一种高效液相色谱串质谱连用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒及其应用。

背景技术

游离脂肪酸(Free Fatty acids，FFAs)在组织能量供应中起着重要作用，尤其是空腹状态下。正常的游离脂肪酸水平对人体健康至关重要，不同的游离脂肪酸在生理和病理状态下发挥着不同的作用，如二十碳五烯酸(C20：5)和二十二碳六烯酸(C22：6)，对炎症、癌症、动脉硬化、胰岛素抵抗和2型糖尿病具有一定的保护作用。

流行病学研究表明，脂肪酸与胰岛素抵抗、心血管疾病、2型糖尿病、高血压、肥胖等慢性病以及乳腺癌、结肠癌等疾病的发生具有一定的关联性。人体血清中脂肪酸的组成及其水平是人体摄入脂肪酸和代谢后的重要指标，进行人体血液中脂肪酸组分分析有助于健康状况评价。

Ω3含有丰富的不饱和脂肪酸(EPA和DHA)，是人体必需的不饱和脂肪酸，有助于调节血脂，预防心脑血管疾病。降低血液粘稠度，保持血液畅通流动，预防血栓形成与中风。增强脑细胞活力，改善记忆力及视力，预防老年痴呆症。EPA降低血液粘稠度，调节血脂，预防动脉硬化。增强心脑血管的健康及肾脏功能。DHA活化脑细胞，增强记忆力。有益于眼部健康，改善视力、延缓视力的衰退。调节血脂，降低血液胆固醇和甘油三脂的含量，提高高密度脂蛋白的含量,强化免疫系统。

然而，现有技术中虽然有一些针对游离脂肪酸的检测方法，但是往往操作较为复杂(如需要萃取步骤)、检测灵敏度较低，并且难以同时定量检测多种游离脂肪酸。因此，本领域迫切需要开发新的检测灵敏度较高并且能够同时定量检测多种游离脂肪酸的技术。目前尚未见同时检测这4种物质的方法及试剂盒的相关报道。

发明内容

本发明的目的就是提供一种高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种高效液相色谱串质谱联用技术检测人干血斑中4种游离脂肪酸的分析试剂盒，

所述的4种游离脂肪酸分别为：α-十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3-二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸；

所述的分析试剂盒包括如下试剂：

(1)标准品溶液：含有α-十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3-二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸的甲醇、人造兔血溶液；

(2)质控品溶液：含有α-十八碳三烯酸，二十碳五烯酸，ω3-二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸的甲醇、人造兔血溶液；

(3)含有内标的提取液：含有十八碳三烯酸-¹³C18，二十碳五烯酸-d5，二十二碳六烯酸-d5的甲醇溶液；

(4)衍生剂：

衍生剂1：10％v/v乙酰氯的二氯甲烷溶液；

衍生剂2：1％v/v三吡啶甲基胺的乙腈溶液；

(5)复溶液：饱和一元醇；

(6)流动相添加剂A：为饱和一元羧酸；

(7)流动相添加剂B：为C₁-C₃胺化合物。

其中，所述的试剂盒还包括：96孔反应板和说明书。