[发明专利]一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法

说明书

本发明涉及一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法，属于生物传感技术领域；本发明采用电致化学发光技术，以降钙素原为分析物模型，以钯杂化石墨烯/聚苯胺纳米阵列结构作为传感平台，以鲁米诺为电化学发光信号源，以羧基化铈掺杂二硫化锡作为二抗标记物，提出了一种电致化学发光传感器的制备方法，该方法具有制备简单、成本低的优点，弥补了传统检测技术操作复杂、成本高、耗时长的缺点，基于该方法研制的传感器应用于降钙素原的实际样品检测，具有灵敏度高、特异性强、响应迅速、便携的优点，其检出限低至1.2 fg/mL，线性范围宽至5 fg/mL—50 ng/mL，在降钙素原的早期临床检测中具有大的潜在应用价值。

技术领域

一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法，属于生物传感技术领域。

背景技术

2012年9月发表的《降钙素原急诊临床应用的专家共识》指出：脓毒症患者的降钙素原水平明显高于非脓毒症患者，且降钙素原升高对细菌感染导致的脓毒症特异性很高，可作为诊断脓毒症和鉴别严重细菌感染的生物标志物，与单纯的临床检测标准相比，降钙素原检测可显著提高脓毒症诊断的敏感性和特异性，因此，实现血清中降钙素原浓度的快速、灵敏、精准检测，对于脓毒症的及早发现与治疗具有重要意义；目前用于检测降钙素原的方法主要是电化学生物传感器，由于电致化学发光技术结合了化学发光与电化学两种技术的优势，除了具有易于操作、可控性强、响应速度快等特点，其灵敏度也要比电化学更高，检测限也更低；基于电致化学发光技术制备的生物传感器具备了比电化学技术更强的优势，这为免疫新方法的提出提供了一种更为强有力的技术支持，本发明正是基于电致化学发光技术而提出的一种生物传感器的制备方法，旨在为弥补现有检测方法的不足，为降钙素原的早期临床检测提供一种全新的分析方法。

发明内容

本发明的技术任务之一是为了弥补现有检测技术的不足，提供一种石墨烯/聚苯胺阵列生物传感器的制备方法，该方法制备过程简单、成本低、信号响应迅速，大大缩短了检测的时间，省时省力；

本发明的技术任务之二是提供所述免疫传感器的用途，该传感器能够快速检测降钙素原，具有灵敏度高、特异性强、重现性好的优点，检出限为1.2 fg/mL，线性范围5 fg/mL-50 ng/mL，在临床检测中有着较大的潜在应用价值。

本发明的技术方案如下

一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝做抛光处理，用超纯水冲洗干净；

（2）在玻碳电极表面滴加6 μL、浓度为2 ~ 4 mg/mL捕获抗体Ab₁标记的钯杂化石墨烯/聚苯胺溶液，置于4 °C下晾干；

（3）滴加3 μL、质量分数为1 ~ 3%的牛血清白蛋白溶液，以封闭电极表面的非特异性活性位点，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，置于4 °C晾干；

（4）滴加6 μL降钙素原的标准溶液或未知浓度的溶液，37 °C下孵化0.5 ~ 2 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，置于4 °C晾干；

（5）滴加6 μL、浓度为2 ~ 4 mg/mL的检测抗体Ab₂标记的铈掺杂二硫化锡-鲁米诺溶液，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，置于4 °C晾干，传感器构建完毕。

一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法，所述捕获抗体Ab₁标记的钯杂化石墨烯/聚苯胺溶液，通过如下步骤制备：

（1）向0.13 ~ 0.15 g的四氯钯酸钠与0.13 ~ 0.15 g的柠檬酸钠固体中，加入30~ 50 mL的去离子水，将混合固体均匀溶解，然后，将0.5 ~ 0.7 mL的硼氢化钠溶液逐滴加入混合液，最后，通过持续搅拌得到黑色的钯纳米粒子，避光储存于4 °C下；