[发明专利]一种可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）人工合成如SEQ ID No：2所示的核酸序列，将目的基因片段插入表达质粒序列上的克隆位点转入表达菌株；

（2）将表达菌株扩大培养，待菌体OD600值到达0.5～1.0时，加入诱导剂进行诱导表达，继续培养，待OD600值开始下降前离心，收集菌体；

（3）将收集的菌体破碎，离心收集的蛋白上清用镍亲和层析纯化，收集洗脱峰后透析浓缩，并置换缓冲液；

（4）在将步骤（3）所得的蛋白中加入SUMO蛋白酶进行酶切后，将所得蛋白溶液采用镍亲和层析柱纯化，标签蛋白SUMO将会吸附至柱子上，而目的蛋白因不带标签会流穿柱子，收集穿流峰即得目的蛋白；

（5）取活化的琼脂糖加入步骤（4）所得到的受体蛋白溶液，将其与琼脂糖偶联；

所述步骤（1）中使用的表达质粒为pET SUMO质粒；表达菌株为大肠杆菌。

2.如权利要求1所述的可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中培养温度为20～40℃；所述诱导剂为诱导剂IPTG。

3.如权利要求1所述的可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中透析浓缩采用分子量为3K的超滤管透析浓缩。

4.如权利要求1所述的可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）或（4）中镍亲和层析纯化采用以下试剂：平衡液为PBS，洗脱液为PBS溶液中加入180mM的咪唑，调节pH=7.0～7.2。

5.如权利要求1所述的可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中受体蛋白偶联至琼脂糖的方法，包括以下步骤：取活化的琼脂糖加入受体蛋白溶液进行蛋白的偶联，10～40℃，100～200rpm，反应时间为5～16h，反应完后，用纯化水抽洗填料至中性；最后加入0.5～1.5M的乙醇胺（pH=8.0）溶液，10～40℃，100～200rpm，反应时间为5～24h，反应结束后用纯化水抽洗填料至中性。

6.如权利要求1所述的可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白的制备方法在制备预防或治疗过敏性疾病药物中的应用。

7.如权利要求1所述的可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白的制备方法在制备IgE抗体或制备IgE吸附剂中的应用。